NIH/3T3胚胎成纖維細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)NIH/3T3胚胎成纖維細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
N,N-DIPROPYLTRYPTAMINE N,N-二丙基色胺 61-52-9
N,N'-HEXAMETHYLENE- BISACRYLAMIDE 六亞甲基雙丙烯酰胺 7150-41-6
N,O-Bis(triMethylsilyl)acetaMide N,O-雙*硅基乙酰胺 10416-59-8
N-[(3R)-1-(3,3-DiMethyl-2-oxobutyl)-2,3-dihydro-2-oxo-5-(2-pyridinyl)-1H-1,4-benzodiazepin-3-yl]-N'-[3-(MethylaMino)phenyl]urea N-[(3R)-1-(3,3-二甲基-2-氧代丁基)-2,3-二氫-2-氧代-5-(2-吡啶基)-1H-1,4-苯并二氮雜卓-3-基]-N'-[3-(甲基氨基)苯基]脲 155488-25-8
N-[(S)-1-Carbethoxy-1-butyl]-(S)-alanine N-[(S)-乙氧羰基-1-丁基]-(S)-* 82834-12-6
N'-[2-(DiMethylaMino)ethyl]-N,N-diMethylethane-1,2-diaMine 40538-81-6
N-[3',4'-Dihydroxy-(E)-cinnaMoyl]-3-hydroxy-L-tyrosine 53755-02-5
N-[3',4'-Dihydroxy-(E)-cinnaMoyl]-L-glutaMic Acid 860295-23-4
N-[3-Chloro-4-(3-Fluorobenzyloxy)-Phenyl]-6-Iodoquinazolin-4-AMine N-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯基]-6-碘喹唑啉-4-胺 231278-20-9
N-[4-[2-(2-AMino-4,7-dihydro-4-oxo-3H-pyrrolo[2,3-d]pyriMidin-5-yl)ethyl]benzoyl]-L-glutaMic acid 1,5-diethyl ester 4-Methylbenzenesulfonate N-[4-[2-(2-氨基-4,7-二氫-4-氧代-1H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰]-L-*二乙酯對甲苯磺酸鹽 165049-28-5
N'-[4-[4-[2-[3-[(DiMethylaMino)Methyl]phenyl]-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-4-yl]-1-ethyl-1H-pyrazol-3-yl]phenyl]-N,N-diMethylurea N'-[4-[4-[2-[3-[(二甲基氨基)甲基]苯基]-1H-吡咯并[2,3-B]吡啶-4-基]-1-乙基-1H-吡唑-3-基]苯基]-N,N-二甲基脲 942918-07-2
N-[4-Methoxy-3-(4-Methyl-1-piperazinyl)phenyl]-2-Methyl-4-(5-Methyl-1,2,4-oxadiazol-3-yl)-1,1-biphenyl-4-carboxaMide hydrate hydrochloride 148642-42-6
N-[5-[(5-tert-butyl-1,3-oxazol-2-yl)Methylsulfanyl]-1,3-thiazol-2-yl]piperidine-4-carboxaMide N-[5-[(5-叔丁基-1,3-惡唑-2-基)甲硫基]-1,3-噻唑-2-基]哌啶-4-甲酰胺 345627-80-7
N-[tris(HydroxyMethyl)Methyl]acrylaMide N-三羥甲基甲基丙烯酰胺 13880-05-2
N1,N1,3-TriMethyl-1,3-butanediaMine N1,N1,3-*基-1,3-丁二胺 933738-55-7
N10-(TRIFLUOROACETYL)PTEROIC ACID N10-三氟乙?;?nbsp;37793-53-6
N-1-CBZ-2-TRIFLUOROMETHYL PIPERIDIN-4-ONE 911298-12-9
(1:2) 623172-56-5
N2-Isobutyryl-D-guanosine N2-異丁酰基鳥苷一水合物 64350-24-9
N2-Methylguanosine 2-甲鳥苷 2140-77-4
O-(2-Azidoethyl)-O-[2-(diglycolyl-aMino)ethyl]heptaethylene glycol O-(2-疊氮乙基)-O-[2-(二羥乙?;?氨基)乙基]七聚乙二醇 846549-37-9
英文名稱 中文名稱 CAS號
Methyl sulfone 二甲基砜 67-71-0
Methyl-(4-broMophenoxy)acetate 4841-23-0
METHYL-2,3,4,6-TETRA-O-BENZYL-D-GLUCOPYRANOSIDE 84799-77-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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