WEHI 22.1B淋巴細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)WEHI 22.1B淋巴細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
N-BOC-EXO-3-AMINOTROPANE N-Boc-exo-3-氨基托烷 744183-20-8
n-Boc-hexahydro-1H-azepin-4-one 4-氧代氮雜環(huán)庚烷-1-羧酸叔丁酯 188975-88-4
NeotuberosteMonine 新對葉百部堿 143120-46-1
Nepafenac 奈帕芬胺 78281-72-8
N,N'-Didansyl-L-cystine 18468-46-7
N,N-Diethyl-1,4-phenylenediaMine N,N-二乙基對苯二胺 93-05-0
N,N-DiethylethylenediaMine N,N-二乙基乙二胺 100-36-7
N,N-Diethyl-M-toluaMide 避蚊胺 134-62-3
N,N'-DIHYDROXY-2,3-DIMETHYL-2,3-BUTANEDIAMINE N,N'-二羥基-2,3-二甲基-2,3-丁二胺 14384-45-3
N,N-DiisopropyltryptaMine(DIPT) N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-N-異丙烷-2-胺 14780-24-6
N,N'-DiMethoxy-N,N-diMethyloxaMide N,N'-二甲氧基-N,N'-二甲基草酰二胺 106675-70-1
N,N-DiMethyl P Toluidine N,N-二甲基對甲苯胺 99-97-8
N,N'-DIMETHYL-1,4-BUTANEDIAMINE N,N-二甲基1,4-丁烷二胺 16011-97-5
N,N-diMethyl-1H-indol-5-aMine 6843-23-8
N,N-DiMethylaMinopropyl acrylaMide 二甲胺基丙基丙烯酰胺 3845-76-9
N,N-DiMethylaniline sulfate N,N-二甲基苯胺 58888-49-6
N,N-DiMethylbenzaMide N,N-二甲基苯甲酰胺 611-74-5
N,N-diMethylbenzylaMine hydrochloride 1875-92-9
N,N-DiMethylcyclohexylaMine N,N-二甲基環(huán)己胺 98-94-2
N,N-DiMethylcyclohexylaMine 氯屈膦酸二鈉(四水合物) 88416-50-6
N,N-DiMethylethanolaMine N,N-二甲基乙醇胺 108-01-0
N,N-DIMETHYL-P-PHENYLENEDIAMINE SULFATE N,N-二甲基-1,4-苯二胺硫酸鹽 60160-75-0
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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