KP-N-NS腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞腦轉(zhuǎn)移上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體KP-N-NS腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞腦轉(zhuǎn)移):
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-(o-tolyl)pyridine 10273-89-9
2-(Pinacolateboryl)indole 吲哚-2-硼酸頻哪醇酯 476004-81-6
英文名稱 中文名稱 CAS號
1H-IMidazol-2-aMine 2-氨基咪唑 7720-39-0
1H-IMidazol-2-aMine,4,5-dihydro-1-propyl- 4,5-二氫-1-丙基-1H-咪唑-2-胺 775519-99-8
1H-IMidazol-2-ylMethylaMine 53332-80-2; (2) 2H-Pyrazol-3-yl-MethylaMine 1037364-03-6
1H-IMidazole,1-(3-Methylphenyl)- 25364-43-6
1H-IMidazole,1-[(4-broMophenyl)Methyl]- 1-(4-BROMOBENZYL)-1H-IMIDAZOLE 72459-46-2
2,2'-AZOBIS[2-(2-IMIDAZOLIN-2-YL)PROPANE] DIHYDROCHLORIDE 2,2'-氮雜雙(2-咪唑啉)二鹽酸鹽 27776-21-2
1H-IMidazole-4-acetic acid, 5-(Methoxycarbonyl)-, Methyl ester 52605-87-5
1H-IMidazole-5-Methanethiol 17496-21-8
1H-INDAZOL-5-AMINE,1- [(4-METHOXYPHENYL)METHYL]- 1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1H-吲唑-5-胺 939756-05-5
1H-INDOL-3-OL 3-羥基吲哚 480-93-3
Indole-3-boronic acid 吲哚-3-硼酸 741253-05-4
1H-Indol-5-ol,2,3-dihydro-6-(trifluoroMethyl)- 200711-19-9
1H-Indol-6-aMine, 5-fluoro- 121716-63-0
1H-indol-6-aMine,2,3-dihydro hydrochloride 28228-73-1
1h-indole,4,5-difluoro-2,3-dihydro-2-Methyl- 85730-59-2
1H-Indole,5-acetonitrile 23690-49-5
1H-Indole-2,3-dione,4-(trifluoroMethoxy)- 4-三氟甲氧基靛紅 959236-54-5
1H-INDOLE-3-CARBOXYLIC ACID,5-BROMO-,ETHYL ESTER 103858-54-4
1H-Indole-4-carboxylicacid, 6-aMino-, Methyl ester, hydrochloride (1:1)( 6-氨基吲哚-4-甲酸甲酯 鹽酸鹽 731810-08-5
1H-Pyrazi,2-a]quinoxaline,2,3,4,4a,5,6-hexahydro-(9CI) 73187-21-0
5-(4-Methylpiperazin-1-yl)-1H-pyrazol-3-aMine [5-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡唑-3-基]胺 537039-17-1
1H-Pyrazole,3-chloro-1-Methyl-5-(trifluoroMethyl)- 161038-55-7
1H-Pyrazole,5-broMo-1-Methyl-(9CI) 5-溴-1-甲基吡唑 361476-01-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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