BxPC-3原位胰腺腺癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)BxPC-3原位胰腺腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-(2-pentenyl)furan 2-(2-戊烯基)呋喃 82550-42-3
2-(3,4,5-TriMethoxyphenyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridine 479551-35-4
2-(acetaMido)5-(chlorosulfonyl)-1,3,4-thiadiazole 32873-57-7
2-(AMINOMETHYL)-4-CHLOROPHENOL 3970/5/6
2-HydroxybenzylaMine 2-羥基芐胺 932-30-9
2-AMINOOXYETHYLAMINE DIHYDROCHLORIDE 2-氨基乙氧基胺二鹽酸鹽 37866-45-8
2-(BENZYLOXY)-ETHYLAMINE 2-芐基-1-乙胺 38336-04-8
2-(BroMoMethyl)iMidazole 2-溴甲基咪唑 735273-40-2
2-(ChloroMethyl)pyriMidine 2-(氯甲基)嘧啶 54198-88-8
2-(DIISOPROPYLAMINO)-ETHANETHIOL 5842/7/9
2-(DIMETHYLAMINO)ETHANETHIOL 卡普他明 108-02-1
2-Chloro-N,N-diMethylethanaMine 2-氯乙基二甲胺 107-99-3
2-(diphenylphosphino)benzenaMine 2-二苯基膦苯胺 65423-44-1
2-DipropylaMino-ethanol 二丙氨基乙醇 3238-75-3
2-(Di-t-butylphosphino)-3,6-diMethoxy-2'-4'-6'-tri-i-propyl-1,1'-biphenyl 2 - (二叔丁基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'三- 1 -丙基- 1,1'-雙苯基 1160861-53-9
2-(DODECYLOXY)ETHANOL 乙二醇月桂酸酯 4536-30-5
2-(HydroxyMethyl)butane-1,4-diol 6482-32-2
3-Hydroxy-2-ethylpropionic acid 4374-62-3
2-(HydroxyMethyl)phenyl-beta-D-glucopyranoside 水楊甙 138-52-3
2-(METHACRYLOYLOXY)ETHYL PHTHALATE MONO 1,2-苯二甲酸的單[2-(2-甲基-1-氧代-2-丙烯基)氧基]乙酯 27697-00-3
ETHYLENE GLYCOL METHACRYLATE PHOSPHATE 2-甲基-2-丙烯酸-2-(膦?;趸┮阴?nbsp;24599-21-1
2-AMinoethylMethylsulfone Hydrochloride 2-(甲砜基)乙胺鹽酸鹽 104458-24-4
2-(Methylthio)acetaMide 2-(甲硫基)乙酰胺 22551-24-2
2-(MORPHOLIN-4-YLMETHYL)BENZENEBORONIC ACID 2-(嗎啉甲基)苯基硼酸 223433-45-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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