CTLL-2T細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)CTLL-2T細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Selenic acid 硒酸 7783/8/6
Seleno-L-Cysteine 硒代-L-半* 10236-58-5
SELENO-DIGLUTATHIONE 33944-90-0
RUE OIL 蕓香油 8014-29-7
Rupatadine * 158876-82-5
RUSCOGENIN 魯斯可皂苷元 472-11-7
R-Viniferin 165883-77-2
RYANODINE 魚尼汀[含量>30%] 15662-33-6
S(+)-gaMMa-Vinyl-GABA S(+)-Γ-VIGABATRIN 74046-07-4
TERGURIDE 特麥角脲 37686-84-3
S-(2-AMINOETHYL)-L-CYSTEINE HYDROCHLORIDE S-(2-氨基乙基)-L-半光氨酸 4099-35-8
S-(2-thiopyridyl)Mercaptopropionohydrazide 115616-51-8
S(TRIFLUOROMETHYL)DIBENZOTHIOPHENIUM-3-SULFONATE S-(三氟甲基)二苯并噻吩-3-磺酸鹽 160656-62-2
S,S-DiphenylsulphiMide 36744-90-8
S-2-AMinoctanoic acid (S)-2-氨基辛酸 116783-26-7
S-2-AMinoheptanoic acid (S)-2-氨基庚酸 44902-02-5
S-2--BroMo Glutaric acid S-2-溴代戊二酸 51528-22-4
S-3,7-DIMETHYL-1-OCTANOL (S)-3,7-二甲基辛烷-1-醇 68680-98-8
SABINENE 檜烯 3387-41-5
S-Adenosyl-L-Methionine S-腺苷-L-蛋氨酸 29908-03-0
S-Adenosyl-L-Methionine S-腺苷*對甲苯磺酸鹽 71914-80-2
Safranal 2,3-二氫-2,2,6-*基苯甲醛 116-26-7
Sagopilone 沙戈匹隆 305841-29-6
Sakuranin 櫻花苷 529-39-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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