SAC-IIC3腹水瘤細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SAC-IIC3腹水瘤細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
L-GLUTAMINE METHYL ESTER HYDROCHLORIDE *甲酯 鹽酸鹽 32668-14-7
Didodecyldimethylammonium bromide 雙十二烷基二甲基* 3282-73-3
TobraMycin * 32986-56-4
5-benzoyl-α-Methyl-2-thiopheneacetic acid 噻洛芬酸 33005-95-7
quadrosilan 夸屈硅烷 33204-76-1
7,8-Dihydro-14-hydroxynorMorphinone 14-羥基二氫降*酮鹽酸鹽 33522-95-1
PanituMuMab 339177-26-3
EprotiroMe 伊羅替羅 355129-15-6
PeMetrexed disodiuM 7-hydrate 培美曲賽二鈉七水合物 357166-29-1
Sodium 2-(7-(3,3-dimethyl-1-(4-sulfonatobutyl)benz(e)indolin-2-ylidene)hepta-1,3,5-trien-1-yl)-3,3-dimethyl-1-(4-sulfonatobutyl)benz[e]indolinium * 3599-32-4
o-MesitylenesulfonylhydroxylaMine 2-[(氨基氧基)磺酰]-1,3,5-*基苯 36016-40-7
3-(Dimethoxymethylsilyl)propylamine 3-氨丙基甲基二甲氧基硅烷 3663-44-3
Rivaroxaban * 366789-02-8
DIHEXYLAMMONIUM ACETATE 乙酸二正己基銨(約0.5MOL/L的水溶液)[用于液相色譜-質(zhì)譜的離子對試劑] 366793-17-1
4-Chloropyrrolo[2,3-d]pyriMidine 4-氯吡咯并嘧啶 3680-69-1
Clenbuterol 克侖特羅 37148-27-9
BIS(TRIFLUOROMETHYL)DISULFIDE 雙(三氟甲基)二硫化物 372-64-5
diallylether of bisphenol A 雙酚 A 雙烯丙基醚 3739-67-1
Sodium 3,5,6-trichloropyridin-2-olate 3,5,6-三氯吡啶-2-醇鈉鹽 37439-34-2
N-ISOPROPYL-2-PYRROLIDONE N-異丙基-2-吡咯烷酮 3772-26-7
DAST 二乙胺基三氟化硫 38078-09-0
Copaene ALPHA-蒎烯 3856-25-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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