C127乳腺腫瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)C127乳腺腫瘤細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(+/-)-3,4-MethylenedioxyMethaMphetaMine 甲醇測試標樣(1-(1,3-苯二唑-5-基)-N-甲基-2-丙胺) 42542-10-9
(1S)-(?)-2,10-CaMphorsultaM 左旋樟腦磺內(nèi)酰胺 94594-90-8
(1S)-1-AMino-2-Methyl-1-phenylpropan-2-ol (1S)-1-氨基-2-甲基-1-苯基-2-丙醇 110480-86-9
(S)-2,2',3,3'-TETRAHYDRO-1,1'-SPIROBI[INDENE]-7,7'-DIOL, >=95% 消旋螺環(huán)二酚(RAC-1) 223259-63-0
(1S)-3,3μ-Bis[2,4,6-tris(1-Methylethyl)phenyl]-1,1μ-binaphthalene-2,2μ-diol (S)-3,3′-雙(2,4,6-三異丙基苯基)-1,1′-聯(lián)-2-萘酚 908338-44-3
Domperidone * 57808-66-9
CALCIUM PHTHALATE HYDRATE 鄰苯二甲酸鈣 5793-85-1
17α-Methyltestosterone * 58-18-4
Midazolam * 59467-70-8
Teroxirone 異氰脲酸Β-三縮水ganyou酯 59653-74-6
DIBROMONITROMETHANE 二溴硝基甲烷 598-91-4
acepromazine 乙酰丙嗪 61-00-7
2,5-dihydroxyterephthalic acid 2,5-二羥基對苯二甲酸 610-92-4
D(+)-Trehalose dihydrate D(+)-海藻糖二水合物 6138-23-4
CocoaMidopropyl betaine 椰油酰胺丙基甜菜堿 61789-40-0
Clerici solution 61971-47-9
4-AMinobenzyl alcohol 對氨基苯甲醇 623-04-1
1,2-Propanediol-1-Acetate 2-羥基丙基乙酸酯 627-69-0
DIPHEMANIL METHYLSULFATE (500 MG) DISCON-TINUED 甲硫二苯馬尼 62-97-5
3-(BroMoMethyl)furan 3-溴甲基呋喃 63184-61-2
(R)-Isoserine (R)-異* 632-11-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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