Acc-3涎腺腺樣囊性癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)Acc-3涎腺腺樣囊性癌細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離 心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Indacaterol 茚達特羅 312753-06-3
(R)-6-(isopropyl)-3-Methylcyclohex-2-en-1-one 4573-50-6
Filibuvir (R)-6-環(huán)戊基-6-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-3-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-A]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-5,6-二氫-2H-吡喃-2-酮 877130-28-4
LORCASERIN (R)-8-氯-1-甲基-2,3,4,5-四氫-1H-3-苯并氮雜卓 616202-92-7
(R)-Benzyl 2-oxotetrahydroFuran-3-ylcarbaMate (R)-2-氧代四氫呋喃-3-基氨基甲酸芐酯 41088-89-5
2(3H)-Furanone,dihydro-4-Methyl-, (4R)- (R)-Β-甲基-Γ-丁內(nèi)酯 65284-00-6
(R)-BOROALA-(+)-PINANEDIOL 497165-15-8
(R,R)-(-)-1,2-cyclooctanediol 108268-29-7
(R,R)-(-)-6,6'-[(1,1'-BIPHENYL-2,2'-DIYL)]BIS[4,8-DI-TERT-BUTYL-1,2,10,11-TETRAMETHYL]DIBENZO[D,F][1,3,2]DIOXAPHOSPHEPIN,BISACETONITRILE ADDUCT 729572-46-7
(R,R)-3,4,5-TRIFLUOROPHENYL-NAS BROMIDE 534570-50-8
(R,R)-KELLIPHITE 729572-33-2
N-Boc-Morpholine-3-carboxylic acid N-BOC-嗎啉-2-羧酸 212650-43-6
2-AMino-2-(3-hydroxyphenyl)acetic acid 31932-87-3
(S)-(-)-1-tert-Butoxycarbonyl-3-aMinopyrrolidine (S)-1-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 147081-44-5
(S)-(-)-2-Azetidinecarboxylic acid (S)-(-)-2-羧基環(huán)丁胺 2133-34-8
(S)-(-)-2-chloropropionic acid (S)-(-)-2-氯丙酸 29617-66-1
(S)-(-)-3-Boc-2,2-diMethyloxazolidine-4-carboxaldehyde 3-反-溴碳-2,2‘-二甲基氧酸酯 102308-32-7
(S)-(-)-3-Butyn-2-ol (S)-(-)-3-丁炔-2-醇 2914-69-4
(S)-(-)-3-Cyclohexenecarboxylic acid (S)-(-)-3-環(huán)己烯甲酸 5708-19-0
(S)-(-)-ALPHA,ALPHA-DIPHENYL-2-PYRROLIDINYL METHYLTMS ETHER (2S)-2-[二苯基[(*基硅酯)氧基]甲基]-吡咯烷 848821-58-9
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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