Bcap-37乳腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)Bcap-37乳腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-(2-nitrophenyl)ethanol 1-(2-硝基苯基)乙醇 3205-25-2
1-(2-PIPERIDINOETHYL)PIPERAZINE 1-(2-哌啶乙基)哌嗪 22763-65-1
1-(4-FLUOROPHENYL)VINYLBORONIC ACID, PINACOL ESTER 1-(4-氟苯基)乙烯基硼酸頻哪醇酯 850567-55-4
1-(4-IODO-2,5-DIMETHOXYPHENYL)PROPAN-2-AMINE 64584-34-5
1-(4-ISOCYANATOPHENYL)PIPERIDINE 879896-41-0
1-(4-Mercaptophenyl)ethanone 3814-20-8
1-(4-Methoxyphenyl)-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-one 1027-69-6
1-(4-METHOXYPHENYL)BUTANE-1,3-DIONE 1-(對甲氧基苯基)-1,3-丁二酮 4023-80-7
1-(4-METHYLBENZYL)PIPERAZINE 1-(4-甲基苯基)哌嗪 23173-57-1
1-(4-Methylphenyl)-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-one 1023-87-6
1-(4-TERT-BUTYLBENZYL)PIPERAZINE 1-(4-叔丁基芐基)哌嗪 956-61-6
1-(5-BROMO-2-FURYL)ETHANONE 4 -氨基- N,N -二甲基苯磺 3199-50-6
1-(5-BroMopyriMidin-2-yl)piperidine-4-carboxylic acid 149506-04-7
1-(5-hydroxy-2-nitrophenyl)ethanone 2-硝基-5-羥基苯乙酮 30879-49-3
FRESELESTAT 208848-19-5
1-(allyloxy)-2,2-bis[(allyloxy)Methyl]butane 682-08-6
1-(AMinoMethyl)-cyclopropanol 1-氨甲基-1-環(huán)丙醇 74592-33-9
1-(Benzyloxy)-3-broMo-5-(trifluoroMethoxy)benzene 1-(BENZYLOXY)-3-BROMO-5-(TRIFLUOROMETHOXY)BENZENE 1221658-68-9
o-Methoxybenzyl broMide 2-甲氧基溴芐 52289-93-7
10g 4-硝基-2-三氟甲基溴芐 694499-22-4
1-(2-NAPHTHYL)METHANAMINE 1-(2-萘基)甲胺 2018-90-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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