NCI-H460 [H460]大細(xì)胞肺癌細(xì)胞0  上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清，ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清，優(yōu)等胎牛血清，標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清，gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清，新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）NCI-H460 [H460]大細(xì)胞肺癌細(xì)胞0：
（1） 收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
（2） 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞NCI-H460 [H460]大細(xì)胞肺癌細(xì)胞0，800rpm離心5min。
（3） 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體（5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體）的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測(cè)即可。
（4） 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
（1）收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
（4）加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
（5）加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測(cè)。
（7）流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。
（2）用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存 ，至少固定18小時(shí)。
（3）調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
（4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品：
1-BroMobutane 溴丁烷 109-65-9
1-BroMododecane 溴代十二烷 143-15-7
15（R）-PROSTAGLANDIN F2α  37658-84-7
17-Azido-3,6,9,12,15-pentaoxaheptadecan-1-aMine 17-疊氮-3,6,9,12,15-五氧雜十七烷-1-胺 516493-93-9
17α-HydroxyyohiMban-16α-carboxylic acid ethyl ester  73840-32-1
17-β-Hydroxy-17-α-ethynyl-5-α-androstano[3,2-β]pyriMido[1,2-α]benziMidazole  144177-30-0
18-Crown-6 18-冠醚-6 17455-13-9
18-HYDROXY-11-DEOXYCORTICOSTERONE  379-68-0
19-HYDROXYCHOLESTEROL  561-63-7
19-Norandrost-4-ene-3,17-dione 19-去甲-4-雄烯二酮 734-32-7
19-Norpregna-5（10）,9（11）-diene-3,20-dione, 17-hydroxy-, cyclic 3-（1,2-ethanediyl acetal） 17-羥基-19-去甲孕甾-5（10）,9（11）-二烯-3,20-二酮環(huán)-3-乙二醇縮醛 42982-49-0
1alpha,25-Dihydroxycholecalciferol 鈣三醇 32222-06-3
1-acetaMido-acetone N-（2-氧代丙基）乙酰胺 7737-16-8
1-ADAMANTYL METHACRYLATE 1-金剛烷基甲基丙烯酸酯 16887-36-8
1-AMi-（hydroxyMethyl）cyclopropane hydrochloride 1-氨基環(huán)丙甲醇鹽酸鹽 115652-52-3
1-AMi-deoxy-D-Mannitol  57027-74-4
D-GLUCAMINE D-萄糖胺 488-43-7
1-AMi-Methylcyclohexane 1-氨基甲基環(huán)己烷 6526-78-9
CyclopropanaMine,1-Methyl-, hydrochloride （1:1）  88887-87-0
1-AMINO-2-NAPHTHOL-4-SULFONIC ACID 4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸 567-13-5
1-AMino-2-phenylcyclopentanecarboxylic acid  5007-32-9
BUT-3-YN-1-AMINE 丁-3-炔-1-胺 14044-63-4
1-aMino-4,5-dihydroxy-8- （MethylaMino）anthracene-9,10-dione  56524-77-7
1-AMino-4-[[4-（ethenylsulfonyl）phenyl]aMino]-9,10-dihydro-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonic acid  62669-67-4
1-aMinobut-3-en-2-ol  4088-60-2
1-AMinocyclopropanecarboxylic acid 1-氨基環(huán)丙烷羧酸 22059-21-8
細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存
原則　　慢凍速溶
４．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。