SW480 [SW-480]結(jié)腸癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SW480 [SW-480]結(jié)腸癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。SW480 [SW-480]結(jié)腸癌細(xì)胞加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2,2'-BIPYRAZINE 10199-00-5
2,2'-Bipyridine-5,5'-dicarbonitrile 2,2-BIPYRIDINE-5,5-DICARBONITRILE 1802-29-5
2,2'-Bipyridine-5,5'-dicarboxylic acid 2,2'-聯(lián)吡啶-5,5'-二羧酸 1802-30-8
2,2'-BIPYRIDINE-6,6'-DICARBOXYLIC ACID [2,2'-聯(lián)吡啶]-6,6'-二羧酸 4479-74-7
2,2'-Bis(2-chlorophenyl)-4,4',5,5'-tetraphenyl-1,2'-biiMidazole 2,2'-二(2-)-4,4',5,5'-四苯基-1,2'-二咪唑 1707-68-2
2,2bis(broMoethyl)-1,3-propanediol 34549-30-9
2,2-dichloroethanethioic S-acid 13639-16-2
2,2-Difluoro-2-pyridin-2-ylethanol 2,2-二氟-2-(2-吡啶基)-1-乙醇 267875-65-0
2,2-diMethoxypropane 2,2-二甲氧基丙烷 77-76-9
2,2-DIMETHYL-2'-FLUOROPROPIOPHENONE 560085-36-1
2,2-DIMETHYL-BUT-3-YNOIC ACID BENZYL ESTER 204588-77-2
2,2-DIMETHYLCYCLOPENTANONE 2,2-二甲基環(huán)戊酮 4541-32-6
2,2-DIMETHYL-PIPERAZINE 2,2-二甲基哌嗪 84477-72-5
2,2-diMethylpyrrolidine 2,2-二甲基吡咯烷 35018-15-6
DIPHENYLKETENE 二苯乙烯酮 525-06-4
3H-IndoliuM,2,3,3-triMethyl-1-(3-sulfopropyl)-, inner salt 29636-96-2
2,3,3-TriMethylbutan-2-ol 五甲基乙醇 594-83-2
2,3,3-TRIMETHYL-5-BROMO-3H-INDOLE 2,3,3-*基-5-溴-3H-吲哚 54136-24-2
2,3,4,4,5,6-hexachlorocyclohexa-2,5-dien-1-one 599-52-0
2,3,4,5- Tetrachloronitrobenzene 2,3,4,5-四氯硝基苯 879-39-0
2,3,4,5,6-PENTAMETHYLBENZYL CHLORIDE 五甲基芐氯 484-65-1
TMS 2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯 24144-92-1
2,3,4,6-tetra-O-acetyl-D-glucopyranose 2,3,4,6-四乙酰-D-葡萄糖 10343-06-3
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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