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干粉培養(yǎng)基原倍液的配制過程及注意點
2022-7-25 閱讀(416)
細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境?，F(xiàn)在詳細了解干粉培養(yǎng)基原倍液的配制:
一、配制過濾除菌的細胞培養(yǎng)基
1、 閱讀培養(yǎng)基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷an酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。
2、根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。
3、 加入規(guī)定量的碳酸氫na及所要添加的物質(zhì)。
4、 輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。
5、 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
6、 用0.22 μm濾膜正壓過濾除菌。
7、溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書。
二、配制可高壓滅菌細胞培養(yǎng)基
1、根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解
2、在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
3、 待溶液冷卻至室溫，加入無菌0.2 mol / L L－谷an酰胺溶液規(guī)定體積、無菌7.5％（w/v）碳酸氫na溶液規(guī)定體積，加注射用水（20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。
4、如果必要，用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
5、溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書
注意事項：
1、 細胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水（經(jīng)石英蒸餾器蒸餾）或超純水，醫(yī)藥上一般為注射用水。
2、 建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用，因為包裝一旦打開，組分可能會變質(zhì)或因受潮而結(jié)團。
3、 溶解干粉培養(yǎng)基時先加入終體積90％－95％的培養(yǎng)用水，添加劑加完后再補足。
4、 如需添加的組分較多時，某一組分*溶解后，再添加另一組分。
5、 待培養(yǎng)基*溶解后再加入碳酸氫na，以免產(chǎn)生沉淀。
6、 所有成分*溶解后，培養(yǎng)基應(yīng)立即過濾或高壓除菌，以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。
7、 在過濾除菌時，一般情況下應(yīng)調(diào)pH比所需值低0.1～0.2個單位，因過濾除菌后，pH值會升高約0.2。
8、在細胞培養(yǎng)過程中，建議不加或加少量的抗生素，如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應(yīng)降低一些。
9、 建議用1 N HCl或1 N NaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，因為用碳酸氫na來調(diào)對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。
