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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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做標(biāo)準(zhǔn)ELISA曲線重點(diǎn)注意細(xì)節(jié)
2022-7-20 閱讀(213)
在ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，我們得到的是經(jīng)酶標(biāo)儀得出的標(biāo)準(zhǔn)品以及樣本的OD值。其中，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度已知，我們可以利用標(biāo)準(zhǔn)品的OD值及其相對(duì)應(yīng)的濃度，以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并用公式表示出來。這樣，我們把樣本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即樣本濃度。
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線
做ELISA實(shí)驗(yàn)的都知道ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的成敗。今天就一起來看下我們?cè)?strong>做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)需要重點(diǎn)注意的細(xì)節(jié)問題。
1. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度*陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2. 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對(duì)低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
4. 做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對(duì)于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999。
5. 樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。
6. 采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
