細(xì)胞:BRL細(xì)胞
中文名稱:大鼠正常肝細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
BRL細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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評(píng)估粒線體中的綜合酵素--丙酮酸脫氫酶復(fù)合體在小鼠新生期間如何調(diào)控胰島的β細(xì)胞的發(fā)育和成熟。
在胰腺β細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的代謝對(duì)于胰島素基因表達(dá)和胞外分泌的賀爾蒙來(lái)說(shuō)是很關(guān)鍵的一環(huán),(HSG細(xì)胞 下頜下腺細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù))但是有越來(lái)越多的證據(jù)顯示,葡萄糖代謝途徑同時(shí)對(duì)于β-細(xì)胞發(fā)育和維持成年人的β細(xì)胞質(zhì)量非常重要。
在小鼠β細(xì)胞中針對(duì)葡萄糖激酶剃除后不僅防止了葡萄糖所刺激的胰島素分泌,(HSY細(xì)胞 腮腺上皮細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù))而且也抑制了β細(xì)胞的增殖,并與細(xì)胞凋亡的增加有關(guān)聯(lián)。
在組織培養(yǎng)中,(人A2780細(xì)胞 人卵巢癌細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù))直接操縱胚胎胰臟的葡萄糖可用性實(shí)驗(yàn)則顯示了轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子神經(jīng)元素3(Neurog3)和NEUROD對(duì)于α和β細(xì)胞的發(fā)育是很必要的存在。
丙酮酸脫氫酶α組件是丙酮酸脫氫酶復(fù)合物調(diào)控丙酮酸代謝的速率決定酵素,(人HL60細(xì)胞 來(lái)源:通派細(xì)胞庫(kù) 人早幼粒急性白血病細(xì)胞系)在老鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)J街刑蕹?beta;細(xì)胞的丙酮酸脫氫酶α組件之后,如同預(yù)期的會(huì)引起胰島素可用性降低以及葡萄糖敏感性釋放,但是卻也同時(shí)觀察到新生老鼠β細(xì)胞數(shù)目減少以及Neurog3,NEUROD和的Pdx1的表達(dá)。