細(xì)胞：SNU387細(xì)胞

中文名稱：人肝癌細(xì)胞

生長特性：貼壁細(xì)胞

SNU387細(xì)胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

SNU387細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

流行性乙型腦炎病毒(JEV)核酸擴(kuò)增檢測

【標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸】

1. 適用標(biāo)本類型：人腦脊液，血清，淋巴結(jié)，病毒細(xì)胞培養(yǎng)液等。

2. 標(biāo)本采集：

人腦脊液：無菌條件下取腦脊液500μl左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

淋巴結(jié)等固體組織：無菌條件下取疑似動物淋巴結(jié)等組織1g，置潔凈的1.5ml EP管中，立即送檢。

病毒細(xì)胞培養(yǎng)液：取培養(yǎng)液500μl左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

3．保存和運(yùn)輸：上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

【適用儀器】主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細(xì)管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認(rèn)證的定量PCR儀。【結(jié)果判定】

測定結(jié)果的計(jì)算：

如果Ct值﹤38，則實(shí)驗(yàn)樣品的JEV RNA含量(基因拷貝數(shù)/ml)= Qty-Copies/ml。

如果38﹤Ct值﹤40,為灰區(qū)建議重新檢測，重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性，否則為陰性。

如果Ct值=40，則JEV RNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）﹤1×102Copies/ml (低于檢測下限)。