細(xì)胞：SK-N-AS細(xì)胞

中文名稱：人腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤

生長特性：貼壁細(xì)胞

SK-N-AS細(xì)胞培養(yǎng)基：DMEM-H+20%FBS+1%NEAA（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

SK-N-AS細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

流行性乙型腦炎病毒(JEV)核酸擴(kuò)增檢測

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繖z測人(動物)腦脊液、淋巴結(jié)以及血清或病毒細(xì)胞培養(yǎng)液等標(biāo)本中流行性乙型腦炎病毒(日本乙型腦炎病毒-JEV)RNA，適用于(JEV)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

【實(shí)驗(yàn)原理】本試劑盒選取一對流行性乙型腦炎病毒(JEV)特異性引物和一條特異性熒光探針， 應(yīng)用Trizol提取RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，用PCR-熒光探針體外擴(kuò)增法對流行性乙型腦炎病毒(JEV)RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增，從而達(dá)到快速檢測之目的。

【實(shí)驗(yàn)組成】

（RNA提取液B、1管、v500μl/管）（JEV RT MIX、2管、140μl/管）（逆轉(zhuǎn)錄酶系、1管、40μl/管）

 （Taq酶系、1管、80μl/管）（JEV-PCR MIX、1管、960μl/管）

  （JEV陽性質(zhì)控品、1管、50μl/管(107Copies/ml)）（陰性質(zhì)控品、1管、500μl/管）

  （DEPC水、1管、2000μl/管）備注: RNA提取液A(Trizol Reagents)等另行配備。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】

陰性質(zhì)控品：全部陰性。沒有曲線增長。

JEV-陽性質(zhì)控品：陽性質(zhì)控品的 Ct 值均應(yīng)小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation數(shù)值介于-0.97~-1之間，correlation數(shù)值等同于∣r∣值）。

 以上條件應(yīng)同時滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無效，全部試驗(yàn)應(yīng)重新進(jìn)行。