細胞：RPMI2650細胞

中文名稱：人鼻腔上皮細胞

生長特性：貼壁細胞

RPMI2650細胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

RPMI2650細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

雞特定基因序列(Chiken)核酸擴增檢測：

1．DNA提取(用戶可根據(jù)需要選擇商業(yè)化DNA提取試劑盒，如Qiagen DNA提取試劑盒)

1.1動物組織、食品或飼料：直接取約50mg上述材料，置入潔凈的1.5ml離心管中，加50μl核酸提取液B 充分混勻（提取液用前需室溫溶解并充分混勻）后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl做PCR反應。

1.2血液：取約0.5ml抗凝血轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml EP管中，加1ml 紅細胞裂解液(1×RCLB，使用前請按照1:9稀釋10×RCLB),劇烈震蕩裂解30s，3,000rpm離心5min，棄上清，重復裂解2次，最后加1ml生理鹽水洗滌一次，5,000rpm離心3min，棄上清，沉淀加50μl核酸提取液B充分混勻（提取液用前需室溫溶解并充分混勻）后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl做PCR反應。

2．PCR擴增 

取單管單份Chiken PCR反應管，加入處理后的樣品(或陰性質(zhì)控品、Chiken -陽性質(zhì)控品)3μl，10,000rpm瞬時離心30s。將各反應管做好標記，置入PCR反應槽內(nèi)，設置反應體積(30μl)，按照下列條件擴增：

循環(huán)條件: 94℃變性2min，后93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s ，共35個循環(huán)。