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臨床ELISA試劑盒測定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式,測定操作非常簡單,一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面,其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測定結(jié)果,且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚?,F(xiàn)分述如下。一、臨床標(biāo)本的收集和保存用于ELISA測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清(漿),有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特
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淡談一下免疫組化為何是實(shí)驗(yàn)室重要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
免疫組化(Immunohistochemistry)至今也有八十余年的歷史了,從1930年免疫組化的理論被提出討論,一直到1941年以帶有熒光色素的抗體,成功地觀察到組織中肺炎雙球菌抗原的存在,至此之后不斷對于方法改良創(chuàng)新,也就形成了我們實(shí)驗(yàn)中才使用的免疫組化這門技術(shù),先來淡談一下免疫組化為何八十幾年來還是都是實(shí)驗(yàn)室中的重要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目之一。人體的器官是由zui小單位細(xì)胞所組成的,一般實(shí)驗(yàn)不論是從細(xì)胞研究蛋白或是基因,我們往往都會(huì)想知道通過zui小單位的細(xì)胞放大到組織后,我們所研究的蛋白或是基因會(huì) -
的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,
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上海勁馬的長期發(fā)展目標(biāo)是以化學(xué)試劑為基礎(chǔ),產(chǎn)品線逐步擴(kuò)展到抗體、蛋白組學(xué)、基因組學(xué)、分離材料等試劑領(lǐng)域,通過自主研發(fā)和兼并重組不斷擴(kuò)展企業(yè)產(chǎn)品線,逐步發(fā)展為試劑的專業(yè)商和電子商務(wù)集成供應(yīng)商,成為試劑行業(yè)發(fā)展的者。開始細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。細(xì)胞與試劑方面:1、細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)4、7.5%NaHC03溶液5、0.25%胰蛋白酶6、P
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來自勁馬生物的研究報(bào)道:NPY是一個(gè)36個(gè)氨基酸的肽,廣泛分布于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)。許多證據(jù)表明NPY在體重調(diào)節(jié)中起到重要的作用,NPYzui主要的作用是增加食物的攝入,降低飽食動(dòng)物的產(chǎn)熱效應(yīng)。促攝食的NPY神經(jīng)元起源于弓狀核,投射到室旁核,釋放的NPY在室旁核與NPY的Y1和Y5受體結(jié)合,引發(fā)強(qiáng)的攝食反應(yīng),并影響能量支出,這種作用在外周可能是通過調(diào)節(jié)交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)完成的。抑制NPY的內(nèi)分泌會(huì)使食物攝入下降,當(dāng)非遺傳性肥胖小鼠禁食時(shí),其下丘腦的NPY和NPYmRNA水平會(huì)提高。在ARC內(nèi)表
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BIM知識課堂:Western化學(xué)發(fā)光檢測常見問題
底物化學(xué)發(fā)光ECL是Westernblotzui常用的顯色方法之一,其原理是辣根過氧化物酶在H2O2的作用下,氧化化學(xué)發(fā)光物魯米諾(Lumino)并發(fā)光,在化學(xué)增強(qiáng)劑存在下光強(qiáng)度可以增大1000倍,通過在照相底片上感光就可以檢測辣根過氧化物酶的存在。Fig:ECL發(fā)光檢測原理示意圖ECL法具有操作簡單,靈敏度高,線性范圍廣等特點(diǎn),現(xiàn)將該方法使用中zui常出現(xiàn)的問題以及解決方法匯總?cè)缦拢含F(xiàn)象原因解決辦法信號弱或無HRP過高引起底物迅速耗竭稀釋一抗/二抗抗體-抗原系統(tǒng)敏感性過低提高抗體濃度/蛋白上樣 -
ICAM1(細(xì)胞間黏附因子)是一種免疫球蛋白樣的細(xì)胞黏附因子,主要表達(dá)于白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。其包括幾種特異性細(xì)胞因子,例如,腫瘤壞死因子,白細(xì)胞介素-1,糖皮質(zhì)激素,干擾素。其配體膜內(nèi)結(jié)合受體整合素淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)和MAC-1在白細(xì)胞,CD43、可溶性分子纖維蛋白原,矩陣因子透明質(zhì)酸,鼻病毒和惡性瘧原蟲瘧疾感染的紅細(xì)胞。ICAM1主要通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)行表達(dá),其啟動(dòng)子包含幾個(gè)增強(qiáng)子,其中有一種是12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯,白細(xì)胞介素-1,脂多糖,糖皮質(zhì)激素,腫瘤壞死因
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科研聚焦:保存血清時(shí)遇突發(fā)問題如何隨機(jī)應(yīng)變?
科研聚焦:保存血清時(shí)遇突發(fā)問題如何隨機(jī)應(yīng)變?產(chǎn)品的保存方法與質(zhì)量有著莫大的關(guān)系,有不少老師反映出在保存血清的時(shí)候會(huì)遇見“什么溫度zui合適”“怎樣避免沉淀物出現(xiàn)”等等問題。而實(shí)驗(yàn)新手們在保存【科研血清】時(shí)也難免會(huì)遇見一些突發(fā)問題,那么我們要如何隨機(jī)應(yīng)變呢?我公司技術(shù)員特別將常見問題整理出分享給大家:1.問:保存血清的方法是怎樣的呢?答:我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時(shí),請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。2.問:如何解