RKO結(jié)腸腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)RKO結(jié)腸腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
ETHYL 5-HYDROXYINDOLE-2-CARBOXYLATE 5-羥基吲哚-2-甲酸乙酯 24985-85-1
ETHYL 5-METHYL-1,2,4-OXADIAZOLE-3-CARBOXYLATE 5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-羧酸乙酯 40699-38-5
ETHYL 8-METHOXY-2-OXO-2,3,4,5-TETRAHYDRO-1H-BENZO[B]AZEPINE-4-CARBOXYLATE 4-[[9-氯-7-(2,6-二氟苯基)-5H-嘧啶并[5,4-D][2]苯并氮雜卓-2-基]氨基]苯甲酸 869363-13-3
ETHYL B-D-GLUCURONIDE 17685-04-0
Ethyl cyanoacrylate 氰基丙烯酸乙酯 7085-85-0
Ethyl D-glucopyranoside 乙基 BETA-D-吡喃葡萄糖苷 3198-49-0
Ethyl diazophenylacetate 2-重氮基-2-苯基乙酸乙酯 22065-57-2
Ethyl difluoroacetate 454-31-9
Ethylene glycol diethyl ether 乙二醇二ym 629-14-1
Mono-ethyl sulfate 硫酸單乙酯 540-82-9
ETHYL ISOCYANATOACETATE 異氰酰乙酸乙酯 2949-22-6
Ethyl Malonyl chloride 氯甲酰乙酸乙酯 36239-09-5
Ethyl Methyl carbonate 碳酸甲乙酯 623-53-0
ETHYL METHYLPHOSPHINATE 甲基次磷酸乙酯 16391-07-4
Ethyl nitrate 硝酸乙酯 625-58-1
ETHYL PIPERAZINE-1-CARBOXYLATE N-哌嗪甲酸乙酯 120-43-4
Ethyl oleate 油酸乙酯 111-62-6
Ethyl pyrazole-4-carboxylate 4-吡唑甲酸乙酯 37622-90-5
Ethyl thioglycolate 巰基乙酸乙酯 623-51-8
Ethyl trans-2- hydroxycinnaMate 反式-2-羥基肉桂酸乙酯 6236-62-0
Ethyl trans-4-oxo-2-butenoate 反式-4-氧基-2-丁烯酸乙酯 2960-66-9
Ethyl trifluoropyruvate 3,3,3-三氟丙酮酸乙酯 13081-18-0
Ethyl vinyl ketone 1-戊烯-3-酮 1629-58-9
ethyl(E,4S)-4-[[(2R,5S)-2-[(4-fluorophenyl)Methyl]-6-Methyl-5-[(5-Met hyloxazole-3-carbonyl)aMino]-4-oxo-heptanoyl]aMino]-5-[(3S)-2-oxopyrro lidin-3-yl]pent-2-enoate (2E,4S)-4-[(2R,5S)-2-(4-氟芐基)-6-甲基-5-(5-甲基異惡唑-3-基甲酰氨基)-4-氧代庚酰氨基]-5-[[(3S)-2-氧代-3-吡咯烷基]-2-戊烯酸乙酯 223537-30-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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