A*鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)A*鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Nepicastat NEPICASTAT 173997-05-2
Nicoboxil *丁氧基乙酯 13912-80-6
NIC-OSU 78348-28-4
NicotinaMide Riboside Triflate 445489-49-6
英文名稱 中文名稱 CAS號
MyristalkoniuM Saccharinate 肉豆蔻基芐基二甲基糖精銨 137951-75-8
Myristoleic acid 肉豆蔻油酸 544-64-9
MYRISTYL NICOTINATE 肉豆蔻醇*酯 273203-62-6
N- Decano 癸烷 124-18-5
N N-DIMETHYL-9-OCTADECENAMIDE 3886-90-6
N N'-DIMETHYLDIPROPYLENETRIAMINE (ATOFI& N’-(3-氨丙基)-N,N-二甲基-1,3-丙二胺 10563-29-8
N-(1,1-DiMethylethyl)-3-[[5-Methyl-2-[[4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]phenyl]aMino]-4-pyriMidinyl]aMino]benzenesulfonaMide N-(1,1-二甲基乙基)-3-[[5-甲基-2-[[4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基]氨基]-4-嘧啶基]氨基]苯磺酰胺 936091-26-8
N-(1-Allyl-2-pyrrolidinyl)Methyl-2,3-diMethoxy-5-sulfaMoylbenzaMide 維拉必利 66644-81-3
N-(1-Naphthyl)ethylenediaMine dihydrochloride N-(1-萘基)乙二胺二鹽酸鹽 1465-25-4
N-(2-(2-Methoxyphenoxy)ethyl)benzylaMine *HCl N-(2-(2-甲氧基苯氧基)乙基)芐胺鹽酸鹽 3246/3/5
N-(2-(METHYLAMINO)ETHYL)ISOQUINOLINE- 84478-11-5
N-(2,6-diMethylphenyl)piperidine-2-carboxaMide N-(2',6'-二甲苯基)-2-哌啶甲酰胺 15883-20-2
N-(2-AMINOETHYL)-2-(2,6-DICHLOROPHENOXY)PROP* 344443-16-9
N-(2-AMINOPROPYL)MALEIMIDE 110008-25-8
N-(2-CARBAMOYL-ETHYL)-VAL-LEU-ANILIDE N-(2-CARBAMOYL-ETHYL)-VAL-LEU-ANILIDE 282725-67-1
N-(2-hydroxy-1-naphthyl)acetaMide N-(2-羥-1-萘基)乙醯胺 117-93-1
N-(2-hydroxyethyl)acetoacetaMide 24309-97-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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