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培養(yǎng)基細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)備的清洗消毒方法

時(shí)間:2014-7-23閱讀:1428
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  培養(yǎng)基細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)備的清洗消毒方法
  
  在組織細(xì)胞培養(yǎng)基中,體外細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)都非常敏感。微生物產(chǎn)品附帶雜物,上次細(xì)胞殘留物及非營(yíng)養(yǎng)成分的化學(xué)物質(zhì),均能影響培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此對(duì)新使用和重新使用的培養(yǎng)器皿都要嚴(yán)格*的清洗,且要根據(jù)器皿的組成材料不同,選擇不同的清洗方法。
  
  1、玻璃器皿的清洗
  
  組織細(xì)胞培養(yǎng)中,使用量zui大的是玻璃器皿,故工作zuizui大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和沖洗四個(gè)步驟。清洗后的玻璃器皿僅要求干凈透明無(wú)油跡,而且不能殘留任何物質(zhì)。
  
 ?。?)浸泡:初次使用和培養(yǎng)使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡,以使附著物軟化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿,在生產(chǎn)及運(yùn)輸過(guò)程中,玻璃表面帶有大量的干固的灰塵,且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì)等。新瓶使用前應(yīng)先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗,然后用*液浸泡過(guò)夜,以中和其中的堿性物質(zhì)。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過(guò)的蛋白質(zhì),干固后不易洗掉,故用后要立即浸入水中,且要求*浸入,不能留有氣泡或浮在液面上。
  
  (2)刷洗:浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗滌劑刷洗,以除去器皿表面附著較牢的雜質(zhì)。刷洗要適度,過(guò)度會(huì)損害器皿表面光澤度。
  
 ?。?)浸酸:清潔液是由重鉻酸鉀、濃硫酸和蒸餾水按一定比例配制而成,其處理過(guò)程稱為浸酸。清潔液對(duì)玻璃器皿無(wú)腐蝕作用,而其強(qiáng)氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)。清潔液去污能力很強(qiáng)。是清洗過(guò)程中關(guān)鍵的一環(huán)。浸泡時(shí)器皿要充滿清潔液,勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時(shí)間一般為過(guò)夜,不應(yīng)少于6小時(shí)。清潔液配制時(shí)應(yīng)注意安全,須穿戴耐酸手套和圍裙,并要保護(hù)好面部及身體裸露部分。配制過(guò)程中可使重鉻酸鉀溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產(chǎn)生的熱量揮發(fā),配制過(guò)程中可使重鉻酸鉀溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產(chǎn)生的熱量揮發(fā),配制溶液應(yīng)選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色。
  
  (4)沖洗:培養(yǎng)基玻璃器皿在使用后,刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗。使之盡量不留污染或潔液的殘跡。沖洗用洗滌裝置。即省力、效果又好。如用手工操作,則需流水沖洗十次以上,每天水須灌滿及倒干凈,用蒸餾水清洗3-5次,晾干備用。
  
  2、膠塞的清洗
  
  細(xì)胞培養(yǎng)中所用的橡膠制品主要是瓶塞。新購(gòu)置的瓶塞帶有大量*及雜質(zhì),應(yīng)先用自來(lái)水沖洗,再做常規(guī)處理,常規(guī)清洗方法是:每次用后立即置入水中浸泡,然后用2%NaOH或洗衣粉煮沸10-20分鐘,以除掉培養(yǎng)中的蛋白質(zhì)。自來(lái)水沖洗后,再用1%*浸泡30分鐘或蒸餾水沖洗后再煮沸10-20分鐘,晾干備用。
  
  3、塑料制品的清洗
  
  塑料自制品現(xiàn)多是采用無(wú)毒并已經(jīng)特殊處理的包裝,打開包裝即可用,多為一次性物品。必要時(shí)用2%NaOH浸泡過(guò)夜,用自來(lái)水充分沖洗,再用5%鹽酸溶液浸泡30分鐘,zui后用自來(lái)水和蒸餾水沖洗干凈,晾干備用。
  
  細(xì)胞培養(yǎng)基的zui大危險(xiǎn)是發(fā)生培養(yǎng)物的細(xì)菌,真菌和病毒等微生物的污染,污染主要是由于操作者的疏忽而引起,常見(jiàn)的原因有操作間或周圍空間的不潔,培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)液消毒不合格或不*,由于有關(guān)培養(yǎng)的每個(gè)環(huán)節(jié)的失誤均能導(dǎo)致培養(yǎng)失敗,故細(xì)胞培養(yǎng)基的每個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)嚴(yán)格遵守操作常規(guī),防止發(fā)生污染。
  
  消毒方法分為三類:(A)物理滅菌法(紫外線、濕熱、過(guò)渣等)。(B)化學(xué)滅菌法(各種化學(xué)消毒劑)。(C)抗生素。
  
  (1)紫外線消毒:用于空氣,操作臺(tái)表面和不能使用其它法進(jìn)行消毒和培養(yǎng)器皿。紫外線直接照射方便、效果好,經(jīng)一定的時(shí)間照射后,可以消滅空氣中大部分細(xì)菌,培養(yǎng)室紫外線燈應(yīng)距地面不超過(guò)2.5米,且消毒進(jìn)物品不宜相互遮檔,照射不到的地方起不到消毒作用。
  
  紫外線可產(chǎn)生臭氧,污染空氣,試劑及培養(yǎng)液都有不良影響,對(duì)人皮膚也有傷害,不宜近照射也進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。
  
 ?。?)溫?zé)嵯荆杭锤邏赫魵庀荆且环N使用zui廣泛、效果的消毒方法。溫?zé)嵯緯r(shí),消毒物品不能裝得過(guò)滿,以防止消毒器內(nèi)氣體阻塞而千百萬(wàn)危險(xiǎn),保證其內(nèi)氣體的流通。在加熱升壓之前,先要打開排氣閥門排放消毒器內(nèi)的冷空氣,冷氣空氣排出后,關(guān)閉排氣閥門,同時(shí)檢驗(yàn)安全閥活動(dòng)自如,繼后開始升壓,當(dāng)達(dá)到所需壓力時(shí),開始記算消毒時(shí)間。消毒過(guò)程中,操作者不能離開工作崗位,要定時(shí)檢查壓力及安全,防止消毒及表皮意外事件發(fā)生。
  
  常用物品消毒壓力及時(shí)間:
  
  培養(yǎng)液、橡膠制品、10磅10分鐘;
  
  布類、玻璃制品、金屬器械、18磅20分鐘。
  
  上兩種是zui常見(jiàn)的物理消毒方法。
  
  (3)化學(xué)消毒法:zui常見(jiàn)的是70%酒精及1‰的新潔而滅,前者主要用于操作者的皮膚,操作臺(tái)表面及無(wú)菌室內(nèi)的壁面處理。后者則主要用器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒。化學(xué)消毒法操作簡(jiǎn)單、方便有效。
  
 ?。?)抗生素消毒:確切應(yīng)記成抗生素滅菌,主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染。

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