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培養(yǎng)基細胞多酚氧化酶提取的原理與作用

時間:2014-7-24閱讀:1852
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培養(yǎng)基細胞多酚氧化酶提取的原理與作用

     多酚氧化酶是植物細胞培養(yǎng)基組織內(nèi)廣泛存在的一種含銅氧化酶,植物受到機械損傷和病菌侵染后,PPO催化酚與O2氧化形成醌,是組織形成褐變,以便損傷恢復,防止或減少感染,提高抗病能力。醌類物質(zhì)對微生物有毒害作用,所以傷口醌類物質(zhì)出現(xiàn)是植物防止傷口感染的愈傷反應(yīng),因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多酚氧化酶也可與細胞內(nèi)其他底物氧化相偶聯(lián),起到末端氧化酶的作用。

  PPO的存在是水果、蔬菜褐變及營養(yǎng)喪失的主要原因之一。PPO氧化內(nèi)源的酚類物質(zhì)生成鄰醌,鄰醌再相互聚合成醌或蛋白質(zhì)、氨基酸等作用生成高分子絡(luò)合物而導致褐色素的生成,色素分子量愈高,顏色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是馬鈴薯解除休眠的指標之一。

  1:粗酶提取:

  水果肉組織按1:1(W/V)比例與003M磷酸緩沖液PH6.0(內(nèi)含0.02M巰基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,勻漿4層后紗布過濾,濾液以6000rpm離心10min,棄除沉淀獲得酶提取液。

  2:鹽析分級沉淀:

  在酶提取液中加入固體硫酸銨使其達到40%飽和度(邊加邊攪拌達到充分溶解),然后6000rpm離心20min棄除沉淀;離心上清液在加入固體硫酸銨達到70%飽和度(邊加邊攪拌達到充分溶解),再以6000rpm離心20min,棄除上清夜,收集粗酶沉淀。 

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