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培養(yǎng)基復(fù)蘇細(xì)胞及凍存細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作

時(shí)間:2014-7-22閱讀:386
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培養(yǎng)基復(fù)蘇細(xì)胞及凍存細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作

    細(xì)胞培養(yǎng)基被凍存在10%二甲基亞砜(DMSO)中防止結(jié)晶的形成,結(jié)晶的形成會(huì)損害細(xì)胞。然而,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞有毒性,快速的進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇是很重要的。

  步驟:

  1.從液氮中取出一管細(xì)胞;

  2.將凍存管置于37℃水浴中2分鐘(或放到管內(nèi)溶液恰好*溶解);

  3.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一15ml Falcon管中;

  4.加入5ml ES培養(yǎng)基(用培養(yǎng)基沖洗凍存管);

  5.離心3分鐘;

  6.棄上清,用2ml ES培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,至少吹打10次;

  7.接種在明膠包被的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿;

  8.孵育。

凍存細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

1.1×PBS洗細(xì)胞并留少許PBS在培養(yǎng)皿內(nèi);

  2.用細(xì)胞瓜刀收集細(xì)胞;

  3.將細(xì)胞轉(zhuǎn)入15ml Falcon管內(nèi)并離心3分鐘;

  4.棄去上清并將細(xì)胞培養(yǎng)基重懸于冷的凍存液中(10cm的培養(yǎng)皿用2ml,15cm的培養(yǎng)皿用6-7ml。)

  5.分裝于凍存管內(nèi),每管1ml;

  6.置-80℃過(guò)夜,第二天移入液氮。

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