培養(yǎng)基復(fù)蘇細(xì)胞及凍存細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作

    細(xì)胞培養(yǎng)基被凍存在10％二甲基亞砜（DMSO）中防止結(jié)晶的形成，結(jié)晶的形成會(huì)損害細(xì)胞。然而，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞有毒性，快速的進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇是很重要的。

　　步驟：

　　1．從液氮中取出一管細(xì)胞；

　　2．將凍存管置于37℃水浴中2分鐘（或放到管內(nèi)溶液恰好*溶解）；

　　3．將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一15ml Falcon管中；

　　4．加入5ml ES培養(yǎng)基（用培養(yǎng)基沖洗凍存管）；

　　5．離心3分鐘；

　　6．棄上清，用2ml ES培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，至少吹打10次；

　　7．接種在明膠包被的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿；

　　8．孵育。

凍存細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟

1．1×PBS洗細(xì)胞并留少許PBS在培養(yǎng)皿內(nèi)；

　　2．用細(xì)胞瓜刀收集細(xì)胞；

　　3．將細(xì)胞轉(zhuǎn)入15ml Falcon管內(nèi)并離心3分鐘；

　　4．棄去上清并將細(xì)胞培養(yǎng)基重懸于冷的凍存液中（10cm的培養(yǎng)皿用2ml，15cm的培養(yǎng)皿用6－7ml。）

　　5．分裝于凍存管內(nèi)，每管1ml；

　　6．置－80℃過(guò)夜，第二天移入液氮。