體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟

2010年09月04日 15:44:25人氣：1623來(lái)源：上海瑞齊生物科技有限公司

1．瘤細(xì)胞懸液接種

（1）無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好（有光澤，淡紅色）瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞。

（2）在PBS中將瘤*碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液。

（3）培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍。

（4）計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至107～108／ml。

（5）常規(guī)消毒后，于接種部位（通常為背部或腋窩腹股溝皮下）用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液（0.1ml／部位，＞106細(xì)胞）。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些。

（6）次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，zui后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。

2．腹水瘤的建立與腹水瘤的接種　將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性（含大量紅細(xì)胞），反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下。

（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

（2）消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細(xì)胞。

（3）接種腹水瘤細(xì)胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。

（4）抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/span>

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