標(biāo)簽：生物反應(yīng)器，細(xì)胞培養(yǎng)，微載體，接種，實(shí)驗(yàn)方法 

Vero細(xì)胞近年來(lái)作為新時(shí)代制藥產(chǎn)業(yè)的熱門細(xì)胞，成為轉(zhuǎn)基因、蛋白、抗體類制藥企業(yè)普遍使用使用的載體工具。使用細(xì)胞生物反應(yīng)器進(jìn)行Vero細(xì)胞的規(guī)模化增殖的接種工藝如下：

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

細(xì)胞∶Vero 細(xì)胞（ATCC級(jí)別的 ）、DMEM培養(yǎng)基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實(shí)驗(yàn)室生物反應(yīng)器，5L搏旅細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、水浴鍋。

二、接種實(shí)驗(yàn)方法

1.微載體的預(yù)處理和滅菌： 接種實(shí)驗(yàn)前的微載體需要用無(wú)鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進(jìn)行吸脹、洗滌，之后進(jìn)行高壓滅菌處理，工藝控制參數(shù)為：吸脹質(zhì)量濃度不超過(guò)50 g·L-1，滅菌溫度121 ℃，20 min。

2.轉(zhuǎn)瓶接種操作：

將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的 Vero 細(xì)胞接種于500ML的轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)，CT-3 微載體濃度為 3g/L，并加入適量的混合牛血清的DMEM培養(yǎng)基，此時(shí)接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。

在微載體細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，可適當(dāng)補(bǔ)加微載體 2g/L，使微載體濃度達(dá)到 5g/L即可接種在5L細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中作為種子細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

3.規(guī)模擴(kuò)培接種操作

（4）當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到達(dá)密度時(shí)，將細(xì)胞及新的微載體一起轉(zhuǎn)入大容積的微載體培養(yǎng)養(yǎng)反應(yīng)器中，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。此過(guò)程的工藝參數(shù)為：溫控： 37士0.1℃，溶解氧為 50%空氣飽和度，攪拌器的轉(zhuǎn)速維持在20～32 r/min即可。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1.1×10'cells/mL時(shí)，即可進(jìn)入下游環(huán)節(jié)進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)。

  介于國(guó)外生物反應(yīng)器成本高昂，售后服務(wù)不便，型號(hào)固定、貨期長(zhǎng)等因素，我國(guó)自主研發(fā)設(shè)備生產(chǎn)的生物反應(yīng)器目前已廣泛應(yīng)用于制藥生產(chǎn)、新藥開(kāi)發(fā)、蛋白研發(fā)、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等環(huán)節(jié)，一些國(guó)內(nèi)生物反應(yīng)器專業(yè)生產(chǎn)商甚至可根據(jù)客戶要求的尺寸進(jìn)行定制化操作,比如搏旅除生產(chǎn)固定型號(hào)規(guī)格外，還可以根據(jù)客戶要求定制不同級(jí)別、規(guī)格的生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐主要用于微生物培養(yǎng)、種子制備、浮細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等，實(shí)現(xiàn)了廠商直供，一罐多用，滿足不同的用戶需求。蘇州阿爾法生物13年專注于生物實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備與實(shí)驗(yàn)室試劑耗材的專業(yè)供應(yīng)，實(shí)驗(yàn)室儀器中所供應(yīng)的生物反應(yīng)器可用于灌流培養(yǎng)、固定床式培養(yǎng)、攪拌通氣式培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)等多種細(xì)胞培養(yǎng)工藝。在細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)、生物制藥等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，同時(shí)我們還提供細(xì)胞培養(yǎng)基、血清、培養(yǎng)添加劑、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、搖瓶等細(xì)胞培養(yǎng)類的試劑耗材 。同時(shí)還提供提供免費(fèi)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備安裝服務(wù)、免費(fèi)技術(shù)支持、免費(fèi)操作指導(dǎo)等服務(wù)。如需了解更多，請(qǐng)或  進(jìn)行咨詢。