MDCK細(xì)胞在基因制藥行業(yè)通過(guò)生物反應(yīng)器規(guī)模化微載體培養(yǎng)后作為流感疫苗和疫苗中的接種細(xì)胞大量使用。

目前疫苗的生產(chǎn)工藝主要有三個(gè)：即使用雞胚直接病毒增殖工藝、轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)傳代細(xì)胞增殖病毒工藝和生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)工藝。

采用生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)工藝的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行規(guī)模化培養(yǎng)，有利于提升細(xì)胞密度和病毒滴度，可以有效實(shí)現(xiàn)批次間的品質(zhì)差異，

具有較好的穩(wěn)定性和安全性，降低生產(chǎn)成本及材料消耗。 

Mdck細(xì)胞的生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)工藝

MDCK細(xì)胞微載體培養(yǎng)工藝的主要步驟:

1) 處理微載體： 在進(jìn)行細(xì)胞微載體時(shí)，對(duì)于GF系列微載體需要用純化水浸泡3-24H后再用PBS緩沖液清洗。而Cytodex系列微載體則可以直接用pH=7. 4的PBS緩沖液浸泡清洗，高壓滅菌，冷卻靜置，再加入細(xì)胞培養(yǎng)液即可；

2) 種子細(xì)胞的培養(yǎng)：MDCK細(xì)胞解凍復(fù)蘇后在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，當(dāng)生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，就可以進(jìn)入轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)階段。

3)  細(xì)胞培養(yǎng)瓶擴(kuò)培：消化后的細(xì)胞繼續(xù)加入培養(yǎng)基稀釋至相應(yīng)倍數(shù)，接入細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行種子細(xì)胞擴(kuò)培。當(dāng)生長(zhǎng)致密度達(dá)90%以上時(shí)，消化細(xì)胞按照1:10的比例接入生物反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)。

4)  微載體接種培養(yǎng)：在生物反應(yīng)器內(nèi)植入微載體，微載體密度為 2-25g/L，每個(gè)載體上的細(xì)胞數(shù)大概為5-50個(gè)左右。 

5) 病毒接種： 當(dāng)生物反應(yīng)器內(nèi)的MDCK細(xì)胞在微載體表面的致密度達(dá)90%以上時(shí)，停止攪拌后按照要求濃度接入病毒，并進(jìn)行補(bǔ)液操作；

6) 產(chǎn)物收獲： 病毒介入后10-12小時(shí)后，需要每小時(shí)取樣觀察CPE變化。當(dāng)感染率大85%左右時(shí)可進(jìn)行病毒收獲階段

  注意：在用搖床進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)時(shí)，轉(zhuǎn)速大概為2-15rpm/min ;不宜過(guò)高。細(xì)胞培養(yǎng)的適宜生長(zhǎng)溫度為37°C。

            在病毒接入生物反應(yīng)器后，注意攪拌器適宜轉(zhuǎn)速為：25rpm，適宜培養(yǎng)溫度為33°C左右，ρΗ維持在7· 5即可,溶氧率為50%。  

生產(chǎn)投入成本預(yù)估

采用生物反應(yīng)器微載體成本根據(jù)微載體的不同，投入成本也會(huì)有所差異，采用Cytodex系列微載體按每1000L病毒收獲液估算投入成本大概為31,0000元左右；采用GF系列微載體進(jìn)行生產(chǎn)，按每1000L病毒收獲液投入成本估算值為16,0000元左右；

生物反應(yīng)器主要用于MDCK細(xì)胞、CHO細(xì)胞 、HEK293細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)。我們 還可以 可根據(jù)客戶(hù)要求的尺寸進(jìn)行生物反應(yīng)器的定制化操作， 實(shí)現(xiàn)了廠商直供，一罐多用，滿(mǎn)足不同的用戶(hù)需求。蘇州阿爾法生物還同時(shí)提供免費(fèi)的安裝服務(wù)、免費(fèi)技術(shù)支持、免費(fèi)操作指導(dǎo)等服務(wù)。如需了解更多，請(qǐng)  或   進(jìn)行詢(xún)問(wèn)。