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上海西格生物科技有限公司
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標準品原理與操作流程

時間:2020/12/9閱讀:720
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標準品原理:

 本試劑盒系由預(yù)包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,則將與酶標板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

標準品保存方法:

一、防蛻變: 

1.防氧化:亞硫酸鈉、、均易被氧化,瓶口應(yīng)涂臘。 

2.防碳酸化:硅酸鈉、過氧化鈉、苛性堿均易吸收二氧化碳,應(yīng)該涂臘。 

3.防風化:晶體碳酸鈉、晶體硫酸銅應(yīng)進行臘封,存放在地下室中。 

4.防分解:碳酸氫銨、濃硝酸受熱易分解,涂臘后,存放在地下室中。 

5.活性炭能吸附多種氣體而蛻變,(木炭亦同),應(yīng)放在干燥器中。 

6.黃磷遇空氣易自燃,永遠保存水中,每15天查水一次:磷試劑瓶中加水、置于有水水糟中,上加鐘罩關(guān)閉。 

7.鉀、鈉保存在火油中。 

8.溶液中滴幾滴稀硫酸,加入過量細鐵粉,進行臘封。 

9.葡萄糖溶液容易霉變,稍加幾滴甲醛即可保存。 

10.甲醛易聚合,應(yīng)開瓶后立即加少數(shù)甲醇;乙醛則加乙醇。 

二、防光: 

1.,濃硝酸及大部份有機藥品應(yīng)該放在棕色瓶中。 

2.硝酸鹽存放在地下室中既防熱,又防光、防火還能防震。 

3.有機試劑櫥窗一概用黑漆涂染。 

4.實驗室用色布窗布,內(nèi)紅外黑雙層。 

標準品操作流程:

1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。

5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。

7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。 

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