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初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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抗體概述及制備過(guò)程

時(shí)間:2024/3/18閱讀:71
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幾種抗體概述:
1.抗角蛋白抗體(AKA),又稱為抗絲集蛋白抗體或抗角質(zhì)層抗體。AKA是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎早期診斷和判斷預(yù)后的指標(biāo)之一,其對(duì)RA患者的診斷的特異性為94% ,而其敏感性為47% ,并是一種鑒別RA和與多發(fā)性關(guān)節(jié)炎相關(guān)的丙型肝炎患者的有效檢驗(yàn)標(biāo)記物。
2.抗核周因子( APF), 是定位于口腔黏附膜細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的顆粒性蛋白復(fù)合物。可在RA患者的血清和關(guān)節(jié)液中測(cè)出,與性別、年齡無(wú)關(guān)。APF顯示了較強(qiáng)的特異性(73%~99%)和敏感性。用間接免疫熒光法檢測(cè),方法精密度較差。
3.抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP),具有相對(duì)好的敏感度和特異性。其實(shí),抗核周因子和抗角蛋白抗體,與CCP在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有相關(guān)性,它們的表位都含有瓜氨酸,稱為瓜氨酸相關(guān)自身免疫系統(tǒng)。

抗體的制備過(guò)程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

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