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人血管緊張素I標(biāo)準(zhǔn)品 SRM 998的產(chǎn)品分析
SRM Number貨號(hào)：SRM 998
品牌：美國(guó)NIST
英文名稱: Angiotensin I (Human)
中文名稱：臨床檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)人血管緊張素I
產(chǎn)品規(guī)格: 0.5 mg
該材料購(gòu)自貝克曼儀器公司生物制品業(yè)務(wù)部（加利福尼亞州帕洛阿爾托）。
使用在 5000 kPa 壓力下運(yùn)行的 25 cm x 0.4 cm 十八烷基硅烷柱對(duì)溶解的 25 μg 該 SRM 樣品進(jìn)行液相色譜分析。 將樣品溶解在 pH 值為 3.5 的 0.1 mol/L 磷酸三乙胺緩沖液中（體積為 81 份）和 19 體積份乙腈的溶液中。 使用兩種洗脫液：一種是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液;另一種是 75 份緩沖液體積與 25 份乙腈的溶液。 通過(guò)測(cè)量 215 nm 和 280 nm 處的吸光度來(lái)監(jiān)測(cè)洗脫。 在洗脫液比例為 81：19 時(shí)，在 215 nm 處檢測(cè)到保留時(shí)間分別為 16.6 min 和 12.2 min 的主峰和次峰，在 280 nm 處僅檢測(cè)到主峰。
收集與每個(gè)峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)，在 6 mol/L HCl 中水解并分析氨基酸組成。 主峰的氨基酸含量表明它是血管緊張素 I。 小峰（215 nm 處吸光度的 < 1 %）不含可檢測(cè)的肽材料。 在這些HPLC條件下，乙酸鹽在溶劑前沿洗脫，無(wú)法定量。 在洗脫液比為 75：25 時(shí)，在任一波長(zhǎng)處均未檢測(cè)到額外的峰，表明不存在非肽、UV 吸收材料。
在脈沖傅里葉變換模式下，使用400 MHz NMR光譜儀測(cè)定了六個(gè)SRM樣品的乙酸鹽含量。通過(guò)將整個(gè)樣品（約0.5mg）溶解在0.5mL氧化氘（100原子%D）中來(lái)制備用于該分析的溶液。向每種溶液中加入少量4,4-二甲基-4-硅戊酸鈉2,2,3,3-d4作為內(nèi)部參考。由于發(fā)現(xiàn)1.922處的乙酸甲酯質(zhì)子信號(hào)與血管緊張素I的質(zhì)子信號(hào)重疊，因此最初制備了不含乙酸鹽的血管緊張素Ⅰ樣品，以 確定乙酸鹽峰下信號(hào)的準(zhǔn)確質(zhì)子計(jì)數(shù)。通過(guò)用0.02mol/L HCl對(duì)材料進(jìn)行兩次凍干，從該樣品中去除乙酸鹽。通過(guò)質(zhì)子核磁共振對(duì)該樣品的分析表明，它不含醋酸鹽，感興趣光譜區(qū)域的質(zhì)子計(jì)數(shù)為3。此后，在不凍干的情況下分析SRM樣品，并從乙酸甲酯峰及其基礎(chǔ)信號(hào)的總積分中減去三個(gè)質(zhì)子的適當(dāng)積分值，以獲得乙酸峰的積分。三個(gè)質(zhì)子積分的適當(dāng)值是通過(guò)平均高場(chǎng)區(qū)域中總共29個(gè)質(zhì)子信號(hào)的積分來(lái)確定的，其中包括許多源自血管緊張素I的甲基、亞甲基和次甲基質(zhì)子的質(zhì)子信號(hào)。質(zhì)子信號(hào)的數(shù)字積分繪制在圖表紙上，并手動(dòng)測(cè)量。
使用了以下儀器參數(shù)：數(shù)據(jù)集大小，16384個(gè)點(diǎn)；4µs（30°翻轉(zhuǎn)角）；頻譜寬度，4kHz；掃描次數(shù)，2000次；
松弛延遲1.95秒。
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