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南京億迅生物科技有限公司
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脂蛋白酯酶(LPL)＆肝脂酶(HL)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義：
LPL（lipoprotein lipase）存在于肝外組織毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，催化血漿中乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中甘油三酯(TG)的水解，在CM及VLDL的降解中發(fā)揮重要作用。HL（hepatic lipase）僅存在于肝內(nèi)皮細(xì)胞表面，在中密度脂蛋白(IDL)和高密度脂蛋白(HDL)代謝中起重要作用。LPL 和HL活性降低，可引起高甘油三酯血癥。在高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理及脂蛋白代謝研究中，常常需要測(cè)定LPL及HL活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、微量注射器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、肝素鈉、氯f(wàn)ang（三氯jia 烷）、無(wú)水乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，室溫保存。
試劑三：自備。實(shí)驗(yàn)前1 d，在10 mL試劑瓶中加入4.8 mL正庚烷，0.2 mL無(wú)水甲醇，5 mL氯f(wàn)ang（自備），蓋緊后混勻，室溫保存。
試劑四：液體×1瓶，室溫保存。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前向試劑瓶中加入5 mL無(wú)水乙醇，充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前向試劑瓶中加入7.8 mL氯f(wàn)ang充分溶解，即為500μmol/L的棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
粗酶液提取：
1、血液中LPL與HL活性測(cè)定：按動(dòng)物體重，150U/kg肝素鈉溶液靜脈注射，20min后取血液，即下表中粗酶液，待測(cè)。
2、組織中LPL與HL活性測(cè)定：組織用生理鹽水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，稱取約0.1 g樣品，加入1 mL生理鹽水，冰浴勻漿，8000rpm，4℃離心10min，取上清液，即粗酶液，待測(cè)。
LPL和HL測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到550 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取帶蓋 玻璃試管，加入2 μL蒸餾水，100μL試劑三，40 μL試劑四，40μL試劑五，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取帶蓋 玻璃試管，加入2 μL標(biāo)準(zhǔn)液，100μL試劑三，40 μL試劑四，40μL試劑五，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 總脂酶測(cè)定管：取帶蓋玻璃試管，加入10 μL粗酶液，100μL蒸餾水，100μL試劑二，蓋緊后混勻；37℃水浴準(zhǔn)確保溫60min；吸取2μL上述溶液，加入另一個(gè)0.5mL EP管，加入100μL試劑三，40 μL試劑四，40μL試劑五，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A總脂酶管。
5. 肝脂酶測(cè)定管：取帶蓋玻璃試管，加入10 μL粗酶液，100μL試劑一，100μL試劑二，蓋緊后混勻；37℃水浴準(zhǔn)確保溫60min；吸取2μL上述溶液，加入另一個(gè)0.5mL EP管，加入100μL試劑三，40 μL試劑四，40μL試劑五，蓋緊后充分震蕩混勻（2min），倒入微量石英比色皿/96孔板，靜置15min，于550nm光吸收，記為A肝脂酶管。
脂蛋白酯酶(LPL)＆肝脂酶(HL)檢測(cè)試劑盒
