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上海雅吉生物科技有限公司

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小鼠心機細胞HL-1熒光鑒定報告

2019-11-28  閱讀(432)

 小鼠心機細胞HL-1熒光鑒定報告

我公司提供該細胞,如有需要,歡迎前來咨詢

一、實驗器材及試劑

1、實驗器材

載玻片及蓋玻片 江蘇世泰實驗器材有限公司

顯微鏡 奧林巴斯 BX53 熒光顯微鏡

2、主要實驗試劑

試劑 廠家 貨號

多聚甲醛 國藥集團 80096618

濃縮型正常山羊血清(封閉) 武漢博士德生物工程有限公司 AR1009

熒光(Cy3)標記羊抗小鼠 IgG 武漢博士德生物工程有限公司 BA1031

TritonX-100 碧云天 ST795

DAPI 碧云天 C1002

抗熒光淬滅封片劑 SouthernBiotech 0100-01

α-Sarcomeric actin(種屬:小鼠) 武漢博士德生物工程有限公司 BM0001

二、細胞爬片免疫熒光實驗步驟

天:

1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用 PBS 浸洗 次,每次 3min;

2. 用 4%的多聚甲醛固定爬片 15minPBS 浸洗玻片 次,每次 3min;

3. 0.5% TritonX-100PBS 配制)室溫通透 20min

4. PBS 浸洗玻片 次,每次 3min,吸水紙吸干 PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室溫

封閉 30min

5. 吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗(α-Sarcomeric actin

并放入濕盒,4℃孵育過夜;

第二天:

6. 加熒光二抗:PBST 浸洗爬片 次,每次 3min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好

熒光(Cy3)標記羊抗小鼠 IgG,濕盒中 20-37℃孵育 1h,PBST 浸洗切片 次,每

次 3min;注意:從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復染核:滴加DAPI 避光孵育 5min,對標本進行染核,PBST5min×4 次洗去多余的 DAPI;

8. 用吸水紙吸干爬片上的液體,用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,然后在熒光顯微鏡下觀

察采集圖像。

一抗稀釋比:

熒光二抗稀釋比:

熒光(Cy3)標記羊抗小鼠 IgG 1100

α-Sarcomeric actin(種屬:小鼠) 1100三、實驗結果:

1、α-SCA200X):圖中紅色熒光為 α-SCA 陽性,陽性率>90%,即:細胞純度>90%

2、α-SCA400X):圖中紅色熒光為 α-SCA 陽性,陽性率>90%,即:細胞純度>90%
 小鼠心機細胞HL-1熒光鑒定報告



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