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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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小鼠肝炎病毒 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒
2019-11-20 閱讀(493)
產(chǎn)品及特點(diǎn) 小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)會(huì)引起小鼠肝炎,但在正常情
況下大多呈不顯性感染,只在應(yīng)激因素激發(fā)下才能成為致死性疾病,主要為肝炎
和腦炎。老齡小鼠感染后會(huì)出現(xiàn)腹水,乳鼠,或在球狀附紅細(xì)胞體參與下感染的
成年小鼠,肝呈黃色或褐色,并有出血斑點(diǎn);腎腫脹而蒼白。小鼠肝炎病毒,無(wú)
論在體內(nèi)外,均易建立持續(xù)感染,帶毒小鼠分布于*,感染范圍廣,影響力
大,因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品,可用于在科研
領(lǐng)域快速定量檢測(cè)小鼠肝炎病毒。它具有下列特點(diǎn)。它具有下列特點(diǎn):
1. 一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
2. 根據(jù)小鼠肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間
轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
規(guī)格及成分 成 份 編號(hào) 十孔盒包裝
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer 91202a 200 μL(橙色蓋)
MMLV-Taq Mix 91202b 75 μL(紅蓋)
超純水 100935 1 mL(藍(lán)蓋)
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 13-54100yw 100 μL(白蓋)
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照
(1×10E8 拷貝/μL)
13-54100pc 50 μL(黃蓋)
天凈沙核酸釋放劑(試用裝) 61202a 20 次(1mL,綠蓋)
使用手冊(cè) 13-54100sc 1 份
注:為避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供小鼠肝
炎病毒專一的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分
分開(kāi)放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?,造成假?yáng)性。
自備試劑 樣品 RNA
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性
對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用 10μL 小鼠肝炎病毒 PCR
陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋的(稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當(dāng)
于 1 萬(wàn)拷貝,可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充分混勻,
此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中,充
分混勻,此為 10000 倍稀釋液)再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照(加
水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂?br />水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提
取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝,其使用手
冊(cè)可以從本公司網(wǎng)站天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號(hào) 61202 下載。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系)
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是
RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中
加入下列成分:
成份 N+2 個(gè)樣品管 RT-PCR
陰性對(duì)照
RT-PCR
陽(yáng)性對(duì)照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL
小鼠肝炎病毒 RT-PCR
引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 個(gè)制備的樣品 各 12.5 μL 不加 不加
超純水 不加 12.5 μL 不加
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照
10000 倍稀釋液
不加 不加 12.5 μL
MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL
4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:
過(guò)程 溫度 時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄 42℃ 30 分鐘
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
(30 個(gè)循環(huán))
95℃ 30 秒
55℃ 30 秒
72℃ 60 秒
延伸 72℃ 5 分鐘
5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果,陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 3750bp。
如果陰性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物,則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗,需
要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照有此擴(kuò)
增產(chǎn)物的情況下,才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)
性,如果無(wú)則為陰性。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 小鼠肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測(cè)試劑盒