 |
上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
會(huì)員.png)
聯(lián)系電話
18117197628
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 陳經(jīng)理
- 電話：
- 021-57763112
- 手機(jī)：
- 18117197628
- 售后電話：
- 18117197628
- 傳真：
- 86-021-57690166
- 地址：
- 上海閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈B102
- 郵編：
- 200000
- 個(gè)性化：
- www.shbhbio-e.com
PCR檢測(cè)試劑盒?PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)原則
2025-2-17 閱讀(132)
PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)原則:
PCR反應(yīng)中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)以一條DNA單鏈為基準(zhǔn)（常以信息鏈為基準(zhǔn)），5′端引物與位于待擴(kuò)增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴(kuò)增片段3′端的一小段DNA序列互補(bǔ)。PCR檢測(cè)試劑盒PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)的基本原則如下：
（1） 引物長(zhǎng)度：15-30 bp，常用為20 bp左右。
（2） 引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C 過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
（3） 引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。
（4）兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。
（5） 引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過(guò)70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
（6）引物3‘端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，選擇是G和C。
（7） 引物的5 ′端可以修飾。如附加限制酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物su、熒光物質(zhì)、di 高辛標(biāo)記，加入其它短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。
