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原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)方法步驟
2024-12-17 閱讀(163)
原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。
一般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞I程等問題的研究。
那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng),我們應(yīng)該怎么做呢?一般有以下兩種方法：
一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液(yi蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí),棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸波,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細(xì)胞的傳代
1、直接傳代
①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3.
?、谟梦艽荡蛐纬杉?xì)胞懸液后,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37*C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
?、賹⒓?xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi) ,離心800-1000rpm , 5分鐘。
②去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。
③將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37*C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
