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原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

大鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

大鼠腸動脈內(nèi)皮分離自腸動脈；腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機體內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腸動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠腸動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

植物赤(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)ELISA試劑盒

PorcineCompleme3,C3ELISAKit 豬補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(間接法二步法)

血液(NO)活性熒光定量檢測試劑盒50次

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

載脂蛋白E   英文名稱：   apolipoprotein/apoprotein E   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   APOE

載脂蛋白P   英文名稱：   Apolipoprotein P   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ApoP

血管生成素相關(guān)生長因子   英文名稱：   Angiopoietin Growth Factors   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AGF

血管生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANG2

大鼠封閉蛋白3(CLDN3)ELISA試劑盒 ，英文名： CLDN3 ELISA Kit

Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌標(biāo)志物DR-70規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞皮爾斯(PERLS-DAB)非血紅素鐵(三價)強化染色試劑盒

RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

大鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein