| 卡塞爾機械（浙江）有限公司
主營產(chǎn)品： 鋁氧化冷水機,超低溫冷凍機組 |
聯(lián)系電話
13575769127
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 王
- 電話：
- 0571-85606184
- 手機：
- 13575769127,15356826256
- 傳真：
- 0571-56389025
- 地址：
- 湖州安吉天子湖工業(yè)園天子湖大道418號
- 郵編：
- 個性化：
- www.nbkassel.net
微生物菌種凍干操作流程
2021-11-29 閱讀(2193)
凍干機適用于大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏，但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。其操作流程如下：
1、安瓿管準備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。
2、保護劑的選擇和準備
保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。
3、凍干樣品的準備
在zui適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進行純度檢查后（參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規(guī)程》（試行）），與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜（以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支）。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短，在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。
4、預凍
一般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。
5、冷凍干燥
采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。
終止干燥時間應根據(jù)下列情況判斷：
—— 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀
—— 真空度接近空載時的zui高值
—— 樣品溫度與管外溫度接近
—— 選用1-2支對照管，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結(jié)
—— 選用一個安瓿管，裝1-2%氯化鈷，如變深蘭色，可視為干燥完結(jié)
冷凍干燥完畢后，取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi)，備用。
6、真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
7、保藏
安瓿管應低溫避光保藏。
8、質(zhì)量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查，如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。
