當(dāng)前位置：南京金益柏生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)外包>>免疫熒光技術(shù)>>免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)

返回列表頁(yè)

參考價(jià)

面議

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)

品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所在地南京市

在線詢價(jià) 收藏產(chǎn)品查看聯(lián)系電話

聯(lián)系方式：陳老師查看聯(lián)系方式

更新時(shí)間：2016-11-04 15:22:13瀏覽次數(shù)：716次

聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來(lái)自環(huán)保在線

產(chǎn)品分類 品牌分類

  實(shí)驗(yàn)外包

wb實(shí)驗(yàn)

免疫組化

免疫熒光技術(shù)

PCR檢測(cè)

流式

HE染色

電鏡

碩士、博士畢業(yè)課題

醫(yī)院課題服務(wù)

全部產(chǎn)品列表

暫無(wú)信息

南京金益柏生物科技有限公司

經(jīng)營(yíng)模式：經(jīng)銷商

商鋪產(chǎn)品：9994條

所在地區(qū)：江蘇南京市

聯(lián)系人：陳老師（老師）

詢價(jià) 給他留言

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。

詳細(xì)介紹

一、服務(wù)介紹

二、實(shí)驗(yàn)原理

將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

三、實(shí)驗(yàn)流程

免疫熒光單標(biāo)記方法

免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子，方法比較簡(jiǎn)單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問(wèn)題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會(huì)直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。

1、所需材料與試劑

a、培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。

b、一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。

c、4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃預(yù)冷20 min)。

d、封閉液。

e、 0.01mol／LPBS緩沖液。

2、染色方法

a、取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片或glass-bottom培養(yǎng)皿，用0.01MPBS洗2-3遍。

b、加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain

c、加入4%多聚甲醛試問(wèn)固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。

d、正常阻斷血清1:20封閉試問(wèn)20-30 min，抑制IgG的非特異性結(jié)合。阻斷血清必須選擇與二抗同一種屬的正常血清。

e、去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃過(guò)夜?？贵w以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。

f、0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。

g、加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。

h、0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用濾紙吸干。

i、90%甘油(PBS配制)封片。

j、激光掃描共焦顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。

免疫熒光雙標(biāo)記方法

免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，首先應(yīng)注意所用的一抗必須是來(lái)自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來(lái)自家兔；B抗體為單克隆抗體，來(lái)自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來(lái)組合。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標(biāo)記。

四、客戶提供

細(xì)胞株或細(xì)胞爬片。注：細(xì)胞爬片不宜太密；細(xì)胞必須固定。組織切片，一抗

五、公司提供

基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝

實(shí)驗(yàn)周期：1-3周

關(guān)鍵詞：熒光顯微鏡顯微鏡共聚焦顯微鏡

其他推薦產(chǎn)品更多>>