細(xì)胞：VERO C1008(E6)細(xì)胞
中文名稱：非洲綠猴腎細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
揭開真核細(xì)胞分泌過(guò)程的秘密
在真核細(xì)胞中,分泌型的脂和蛋白質(zhì)從高爾基體反面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)逐步移向質(zhì)膜,該過(guò)程受到了載體囊泡網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)格控制。這種囊泡是如何形成的，現(xiàn)在還沒(méi)有清晰的答案。
蛋白激酶D和磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ相互作用，并促進(jìn)該過(guò)程的發(fā)生。
人體內(nèi)有三種蛋白激酶D同工型，PKD1-3。已經(jīng)知道的至少有兩個(gè)，PKD1和PKD2，在TGN膜形成載體囊泡中起重要作用；
具體過(guò)程仍然不知。磷酸化的膜成分PI(4)P也被認(rèn)為調(diào)節(jié)著這個(gè)過(guò)程?？蒲腥藛T從而研究了在從TGN到質(zhì)膜的囊泡運(yùn)輸中，PKD蛋白和PI4K之間的相互關(guān)聯(lián)情況。
在哺乳細(xì)胞中有很多的PI4K酶，PI4KIII是一種與酵母的PI4K酶--Pik1同源的蛋白激酶。Pik1在酵母的“高爾基體-細(xì)胞表面”運(yùn)輸通路中起作用。
在哺乳細(xì)胞中也研究了這個(gè)蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)三種PKD同工型和PI4KIIIβ共定位于高爾基體復(fù)合物中；體外的實(shí)驗(yàn)表明，PKD同工型可以促使PI4KIII磷酸化。
PKD1和PKD2可以識(shí)別PI4KIIIβ的磷酸化位點(diǎn)Ser294，該位點(diǎn)在酵母Pik1具有保守性。通過(guò)使用抗磷酸化位點(diǎn)的抗體，科研人員證實(shí)了PKD介導(dǎo)的PI4KIIIβ磷酸化過(guò)程在體內(nèi)也同樣發(fā)生。
