細(xì)胞：CFPAC-1細(xì)胞
中文名稱(chēng)：人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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哺乳細(xì)胞的細(xì)胞核是一個(gè)高度復(fù)雜的自組裝結(jié)構(gòu)，染色質(zhì)是其主要成分。
已有大量證據(jù)表明基因表達(dá)調(diào)控過(guò)程經(jīng)常伴隨著染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化，這可能是基因表達(dá)調(diào)控的一個(gè)更高級(jí)的層面。
以轉(zhuǎn)錄工廠(transcription factory)模型為例，該模型最早在1993年提出，基于電鏡和免疫熒光的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)大量RNA Pol-II集合的位點(diǎn)，多個(gè)基因被招募到這些轉(zhuǎn)錄工廠共轉(zhuǎn)錄。
然而到目前為止這個(gè)模型還存在很大爭(zhēng)議，最主要的原因是研究手段的限制。之前的數(shù)據(jù)主要依賴(lài)于電鏡和熒光顯微鏡，電鏡雖然分辨率高，但沒(méi)有動(dòng)態(tài)信息；
熒光顯微鏡則沒(méi)有足夠的分辨率。實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)錄工廠RNA Pol II cluster的動(dòng)態(tài)定量觀測(cè)對(duì)其機(jī)理的研究有重要意義。
通過(guò)發(fā)展和應(yīng)用貝葉斯超分辨率顯微技術(shù)，在活細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)原位觀察到了單個(gè)轉(zhuǎn)錄工廠的組裝和解聚的動(dòng)態(tài)過(guò)程，并且測(cè)量了活細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄工廠的數(shù)目和大小隨時(shí)間以及細(xì)胞環(huán)境的影響。
揭示了轉(zhuǎn)錄工廠產(chǎn)生和消失的異質(zhì)性，支持了轉(zhuǎn)錄工廠產(chǎn)生的on-demand模型，證明了轉(zhuǎn)錄工廠在pre-elongation phase招募Pol II 分子。這一成像分析方法也可以應(yīng)用到其他納米尺度的活細(xì)胞核內(nèi)動(dòng)態(tài)觀測(cè)研究中。
