細胞:C6細胞
中文名稱:大鼠膠質(zhì)瘤細胞
生長特性:貼壁細胞
培養(yǎng)基:DMEM-L +10% FBS (GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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TGF-β信號在人類多種腫瘤如胃腸道腫瘤、乳癌、卵巢癌和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化、浸潤及轉(zhuǎn)移中均扮演重要角色,且能影響腫瘤細胞對化療的敏感程度。因而,這一信號通路被視作是重要的癌癥潛在治療靶點。
利用全基因組cDNA篩查研究人員確定了核受體NR4A1是TGF-β信號一個強有力的激活因子。NR4A1通過加速AXIN2–RNF12/ARKADIA誘導(dǎo)SMAD7降解促進了TGF-β/SMAD信號。
研究證實,NR4A1與SMAD7和AXIN2相互作用,有力且直接地誘導(dǎo)了AXIN2表達。喪失NR4A1會抑制TGF-β誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移,而少量異位表達NR4A1則可以一種TGF-β依賴性方式刺激轉(zhuǎn)移。
研究發(fā)現(xiàn)炎性細胞因子可有力地誘導(dǎo)NR4A1表達,在體內(nèi)外促成TGF-β介導(dǎo)的乳癌細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。值得注意的是,在有高度免疫浸潤的乳癌患者中NR4A1表達升高,且NR4A1表達與磷酸化的SMAD2水平呈弱相關(guān),是不良預(yù)后的一個指標。
結(jié)果表明在乳癌中炎癥誘導(dǎo)的NR4A1是促癌TGF-β信號過度激活的一個重要的決定因子。