細(xì)胞:M619細(xì)胞
中文名稱:人黑色素瘤細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
M619細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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研究利用缺少PU.1的小鼠祖細(xì)胞來揭開這個(gè)謎底。他們通過引入不同量的PU.1來操縱這些細(xì)胞的決策機(jī)器。 Beta-TC-6細(xì)胞:貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫培養(yǎng)條件:80% DMEM、10% FBS
當(dāng)研究人員引入低濃度的PU.1時(shí),他們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能同時(shí)活化巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞基因。這點(diǎn)發(fā)現(xiàn)非常重要,因?yàn)樗C實(shí)了這種混合的細(xì)胞血統(tǒng)模式如何被建立。
BEND.3細(xì)胞:貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫培養(yǎng)條件:90% DMEM高糖、10% FBS
他們發(fā)現(xiàn),當(dāng)增加PU.1(能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分化)的濃度時(shí),細(xì)胞首先經(jīng)歷一種過度態(tài)的混合性細(xì)胞血統(tǒng)狀態(tài),但之后會(huì)觸發(fā)新的、能抑制嗜中性粒細(xì)胞基因的調(diào)節(jié)蛋白并活化巨噬細(xì)胞基因。
研究人員確定出了在嗜中性粒細(xì)胞分化過程中能關(guān)閉巨噬細(xì)胞基因的對(duì)應(yīng)抑制蛋白。
BeWo細(xì)胞:貼壁細(xì)胞 通派細(xì)胞庫培養(yǎng)條件:90% F12K、10% FBS