細(xì)胞：HCT-15細(xì)胞
中文名稱：人T淋巴瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
HCT-15細(xì)胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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從多利羊開(kāi)始到現(xiàn)在，體細(xì)胞克隆成功率始終很低，一些科學(xué)家因此懷疑，這些研究中克隆出的動(dòng)物是由混入體細(xì)胞的成體干細(xì)胞發(fā)育而成，根本不是真正的體細(xì)胞克隆。
為了檢驗(yàn)成體干細(xì)胞和體細(xì)胞的克隆潛力，采用了造血干細(xì)胞和處于不同分化階段的體細(xì)胞進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)，包括由造血干細(xì)胞初步分化而成的幼稚細(xì)胞——祖細(xì)胞，以及分化后的成熟體細(xì)胞——粒細(xì)胞。結(jié)果顯示，粒細(xì)胞的克隆效率比造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞更高。(U-87 MG細(xì)胞 星形膠質(zhì)母細(xì)胞 種屬：人)
這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，即使是已經(jīng)分化的體細(xì)胞，如造血細(xì)胞中的粒細(xì)胞，也完整地保留了形成個(gè)體的所有遺傳信息，可以支持胚胎發(fā)育成為個(gè)體，而且其成功率甚至遠(yuǎn)高于分化程度較低的細(xì)胞。(UM細(xì)胞 黑色素細(xì)胞 種屬：人)(SW620細(xì)胞 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 種屬：人)
由于實(shí)驗(yàn)證明成體干細(xì)胞的克隆成功率比體細(xì)胞更低，多利羊作為第一只體細(xì)胞克隆動(dòng)物的身份也因此更加真實(shí)可信。
