細(xì)胞：CEF細(xì)胞
中文名稱(chēng)：雞成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
CEF細(xì)胞培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀(guān)察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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成熟腦細(xì)胞表面的三種特定蛋白量的增加可促使細(xì)胞產(chǎn)生新的生長(zhǎng)延伸。
該研究探討了小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞上的三個(gè)相關(guān)的受體蛋白：GPR3，GPR6和GPR12。
研究增加這三種蛋白的量后，細(xì)胞生長(zhǎng)延伸比蛋白水平正常時(shí)的神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)大三倍，延伸速度比對(duì)照細(xì)胞快4-8倍。
結(jié)果顯示:這三種蛋白可能是用于治療中風(fēng)、腦和脊髓損傷及神經(jīng)退行性疾病的重要靶點(diǎn)。
這些蛋白量的增加與神經(jīng)細(xì)胞cAMP內(nèi)的一種重要的信號(hào)分子的水平的增加有關(guān)。這個(gè)分子在調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和生存，以及傳輸神經(jīng)沖動(dòng)的軸突再生中起著關(guān)鍵作用。
隨著哺乳動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的成熟，其細(xì)胞內(nèi)的cAMP水平下降，這可以部分解釋為什么成熟神經(jīng)細(xì)胞受損的軸突不能再生。
為cAMP在軸突生長(zhǎng)中起著重要作用這一觀(guān)點(diǎn)提供了更多證據(jù)，并顯示出這些受體蛋白可能在調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞cAMP的產(chǎn)生中起主要作用。
從小鼠與大鼠腦組織神經(jīng)母細(xì)胞瘤中取得神經(jīng)細(xì)胞，使之在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)以了解更多關(guān)于這三種蛋白及其調(diào)控cAMP生長(zhǎng)中的作用。
向這些細(xì)胞中注入三種基因以增加這三種蛋白的含量水平，然后用一種被稱(chēng)為核糖核酸干擾的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)關(guān)閉這三種蛋白的產(chǎn)生。
上述三個(gè)蛋白分子中GPR3在神經(jīng)細(xì)胞中最為豐富，而GPR12刺激神經(jīng)細(xì)胞延伸的作用強(qiáng)。
研究表明，阻斷GPR3的產(chǎn)生會(huì)大大減慢神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，研究者們通過(guò)修復(fù)GPR3或GPR12的產(chǎn)生扭轉(zhuǎn)了這種效應(yīng)。
三種蛋白質(zhì)的含量水平高也與較高水平的cAMP有關(guān)，同時(shí)GPR6和GPR12能增加兩倍到三倍的水平。
這三種蛋白能加快神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)即使在抑制分子的存在下也是如此，我們迫切希望能找出可以在臨床前中風(fēng)或脊髓損傷動(dòng)物模型身上重現(xiàn)此結(jié)果的方法。
