細胞：BT20細胞
中文名稱：人乳腺癌細胞
生長特性：貼壁細胞
BT20細胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基(含15%血清)，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時)。
BT20細胞傳代：
1)：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據(jù)實際情況，把握消化時間)。
2)：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3)：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4)：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周2-3次)，待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；)
豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸擴增檢測
實驗目的：用于檢測豬血清、腦、心肌以及淋巴結等組織標本或病毒培養(yǎng)液中豬腦心肌炎病毒(EMCV)mRNA，適用于豬腦心肌炎病毒感染的輔助診斷及流行病學調查。其檢測結果僅供參考。
實驗原理：選取一對豬腦心肌炎病毒特異性引物結合一條特異性熒光探針，采用Trizol提取豬腦心肌炎病毒RNA，經過逆轉錄作用生成cDNA，后者在耐熱DNA聚合酶(Taq酶)作用下，配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分，通過一步PCR-熒光探針體外擴增法對豬腦心肌炎病毒RNA進行擴增，從而達到快速實時定量檢測之目的。
實驗組成：(RNA提取液B、1管、500μl/管)(逆轉錄酶系、1管、40μl/管)(EMCV–RT MIX、1管、140μl/管)
(Taq 酶系、1管、80μl/管)(EMCV–PCR MIX、1管、960μl/管)(DEPC水、1管、2000μl/管)
(EMCV 陽性質控品、1管、50μl/管(1×107 Copies/ml))(陰性質控品、1管、500μl/管)
備注: RNA提取液A(Trizol reagents)等另行配備。
適用標本類型：豬血清、腦、心肌以及淋巴結等組織標本或病毒培養(yǎng)液等。
標本保存和運輸：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
