細(xì)胞：BEL-7404細(xì)胞
中文名稱：人肝癌細(xì)胞
生長特性：貼壁細(xì)胞
BEL-7404細(xì)胞培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基(含15%血清)，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時)。
BEL-7404細(xì)胞傳代：
1)：細(xì)胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時間)。
2)：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時；
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。
3)：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4)：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周2-3次)，待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；)
馬流感病毒通用型(EIV)核酸擴(kuò)增檢測
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />
適用于檢測發(fā)病動物鼻孔膿性分泌物、鼻粘膜試子及尸檢動物肺臟、淋巴結(jié)等組織以及細(xì)胞培養(yǎng)液中馬流感病毒(EIV)RNA，適用于馬流感病毒(EIV)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。
實(shí)驗(yàn)原理：
選取一對馬流感病毒(EIV)H3N8型及其近似株特異性引物和一條特異性熒光探針， 應(yīng)用Trizol提取RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分，用PCR-體外擴(kuò)增法對馬流感病毒RNA進(jìn)行擴(kuò)增，從而達(dá)到快速檢測之目的。
實(shí)驗(yàn)組成：
(RNA提取液B、1管、500μl/管)(逆轉(zhuǎn)錄酶系、1管、40μl/管)
(Taq酶系、1管、40μl/管)(EIV PCR MIX、1管、800μl/管)(EIV 陽性質(zhì)控品、1管、50μl/管)
(陰性質(zhì)控品、1管、500μl/管)(DEPC水、1管、2000μl/管)
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
陰性質(zhì)控品：全部陰性。
EIV陽性質(zhì)控品：陽性質(zhì)控品的 Ct 值均應(yīng)小于 30，且呈標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線。
以上條件應(yīng)同時滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無效，全部試驗(yàn)應(yīng)重新進(jìn)行。
