生物實驗中培養(yǎng)細胞的步驟至關重要，江蘇菲亞生物科技的研究人員通過每次的實驗總結(jié)出培養(yǎng)細胞常用的固定劑和固定方法。常用的培養(yǎng)細胞常用固定劑有4％多聚甲醛磷酸緩沖液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃預熱的PBS輕洗細胞。

    1．4％多聚甲醛磷酸緩沖液  固定10―20分鐘，干燥。

    2．甲醇  10‰甲醇固定5―20分鐘，自然干燥。

    3．丙酮  4℃冷丙酮固定組織穿透性和脫水性強，抗原保存好，很少用于組織切片，常用于培養(yǎng)細胞和細胞涂片的固定，平時丙酮4℃低溫保存?zhèn)溆茫R用時，將載玻片插入冷丙酮內(nèi)5～10分鐘，取出后自然于燥。

    4．乙醇  95％乙醇脫水性強，易引起組織收縮、變硬，影響切片質(zhì)量，因而固定時間不宜過長(2小時內(nèi))。乙醇使蛋白變性程度輕，固定后蛋白 可再溶解，在染色中孵育時間長的情況下，抗原可流失，并減弱反應強度。

    5．乙醚(或三lu甲烷)  與乙醇等量混合對組織穿透性*，即使涂片上含較多的黏液，固定效果仍較好，是理想的細胞固定液。

    培養(yǎng)細胞固定之后晾干可使細胞牢固地黏附在載玻片上，故對于容易脫落的細胞應延長晾干時間。晾干之后PBS漂洗3次，然后進行組織化學或免疫組織化學染色。

    用于免疫組織化學的固定劑種類很多，不同的抗原和標本均可醛類固定液，如效果不佳，再試用其他固定液。選擇固定液的標準：一是能地保持組織細胞的形態(tài)結(jié)構；二是zui大限度地保存抗原免疫活性和被檢物不被丟失。一些含重金屬固定液可用于組織化學標本的固定，但在免疫組織化學染色中禁用。