抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清，一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。

抗血清的制備過程：

一、材料：

1、金屬編號牌（對動物作標(biāo)記錄）或染料；

2、1毫升，5毫升、20毫升注射器；

3、*頭（9#，12#），卡價苗針頭（41/2 # — 51/2 #）；

4、滅菌平皿，疫苗瓶，*瓶，皮塞以及吸管，脫脂棉；

5、卡介苗（75mg/ml）；

6、抗原（小鼠血清）；

7、*溶液，*溶液和5%葡萄糖溶液；

8、液體石臘（醫(yī)用），羊毛臘（配制佐劑用）；

9、滅菌生理鹽水，消毒用酒精，2.5%碘酒；

10、1.5%瓊脂，玻板，飯盒（保濕、保濕作用）；

11、實驗動物（家兔）。

二、步驟

1、動物的選擇

羊、馬、雞、猴、豚鼠、兔都是常用的免疫動物，在實驗中，選擇動物時應(yīng)考慮抗原與動物的種屬關(guān)系、抗原性質(zhì)與動物種類、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及動物個體等因素。免疫用動物應(yīng)選適齡、健壯．為雄性。zui常用的實驗動物是家兔，一般選擇選擇年齡在6個月以上當(dāng)年繁殖的♂性，體重2 ～3公斤，健康家兔三只，免疫前用金屬編號牌固定兔耳，或用染料涂沫在動物的背部，作出明確的標(biāo)記。

2、抗原制備

抗原乳劑的制備：其方法一般有兩種，其一，將等量的*佐劑（注意佐劑必須預(yù)先加熱融化，但不超過50℃）和抗原溶液分別吸入兩個5ml注射器內(nèi)，在兩個注射器的12# 

針頭間套上一根長約8～12cm的醫(yī)用無毒塑料管，將兩個注射器連接在一起（塑料管必須先經(jīng)酒精浸泡消毒，使用時取出，用滅菌生理鹽水沖洗后，與注射器針頭相連接，塑料管與針頭的口徑須合適，不能松，稍緊些為宜），針頭插進(jìn)塑料管約1～2cm然后由兩人相對而坐后緩緩?fù)苿俞樔?，使管?nèi)溶液進(jìn)入塑料管道至對側(cè)注射器內(nèi)，每次推動針蕊時必須把管內(nèi)容物全部推出，另一側(cè)也同樣操作，使管內(nèi)液體往返混合，直至形成油包水乳劑（Water-in-oil enulsion）為止。

其二是，將等量的佐劑和抗原溶液倒入缽內(nèi)，經(jīng)過反復(fù)碾磨，也可形成油包水乳劑，該法主要優(yōu)點是快速，可靠，不足方面主要是由于粘附過多，浪費佐劑及抗原。

制成的乳劑是否形成油包水乳劑直接影響免疫效果，因此，必須進(jìn)行質(zhì)量檢查，檢查的方法是將制成的乳劑滴一滴在涼水（自來水）表面，質(zhì)量合格的乳劑滴入水面保持滴珠完整而不分散，不合格者進(jìn)入水面后立即擴(kuò)散，水面油亦逐漸擴(kuò)大，這就必須要繼續(xù)操作至質(zhì)量合格為止。

3、免疫途徑，劑量和免疫周期

抗原注射途徑可根據(jù)不同抗原及試驗要求，選用皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結(jié)內(nèi)等不同途徑注入抗原進(jìn)行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴結(jié)周圍、耳后等處皮內(nèi)或皮下多點注射。初次免疫與第二次免疫的間隔時間多為2～4周。常gui免疫方案為抗原加CFA皮下多點注射進(jìn)行基礎(chǔ)免疫；再以免疫原加IFA作2～5次加強(qiáng)免疫，每次間隔2～3周，皮下或腹腔注射加強(qiáng)免疫。

4、試血，測定抗體效價

一般在第三次免疫后7～10天即可于兔耳靜脈或小鼠尾尖取少量血，分離出血清之后進(jìn)行試血。

• 環(huán)狀試驗，較為經(jīng)典的方法，目前較少采用，如與20μg/ml以下的抗原于30 min內(nèi)能出現(xiàn)的沉淀環(huán)，即測定抗體效價達(dá)1：5000以上時為合格。
• 免疫雙擴(kuò)散法，這是zui常用的試血方法，其具體方法是，中間孔加稀釋的抗原（1mg/ml）10μl，周圍孔順時針方向加制備的抗血清分別為1:2, 1:4, 
• 1:8，1:16，1:32和1:64，（用生理鹽水或PBS稀釋）。經(jīng)37℃保溫24h后觀察結(jié)果，效價在1:16以上即可決定放血。

5、放血

經(jīng)效價檢查合格后即可放血。放血前動物應(yīng)停食12 h，以減少血清中的脂肪含量。如擬保留該免疫動物，可直接由心臟取血，或切開耳緣靜脈滴血或心臟穿刺取血。取血后由靜脈緩緩注入等量5%葡萄溶液以補(bǔ)足失血量。取血的動物經(jīng)2～3個月休息，可再次加強(qiáng)免疫后取血。

6、分離血清

必須在無菌條件下進(jìn)行，待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后，用無菌滴管在無菌環(huán)境（例如超凈工作臺）中把血kuai與瓶壁剝離后，放入37℃，1～2h取出后放入4℃過夜，使血清充分析出（不能冰凍，否則產(chǎn)生溶血），經(jīng)離心沉淀分出血清，放進(jìn)低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

7、抗血清的保存

1）經(jīng)簽定合格后的抗血清，以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的疊氮鈉，使其zui后濃度分別為0.01%或0.05%。

2）用無菌滴管將抗血清分裝小管，每管裝1ml左右。

3）-20℃以下保存，可保存2年以上。

4）如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下，保存時間更久