1.如何測定引物的OD值？ 
用紫外分光光度計在260nm波長測定溶液的吸光度來定量，請注意紫外分光光度計的使用，測定時溶液的吸光度稀釋到0.2-0.8之間（吸光度太高或太低會有較大的誤差）。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，取部分溶液稀釋到1ml并在1ml標(biāo)準(zhǔn)比色皿中測定其吸光度，即為所測體積的OD值，進(jìn)而可以計算出母液的OD值。 
舉例：您拿到一管干粉的DNA，用1ml水溶解成母液，取該母液50μL稀釋成1ml并在1ml標(biāo)準(zhǔn)比色杯中測定的吸光度為0.25，說明該50μL中含有0.25OD的DNA，也即說明原來1ml母液中含有5OD的DNA。

2.怎樣溶解引物？ 
我們的的合成報告單給出了每OD引物稀釋為100μmoL/L（即100pmol/ul）濃度的加水量，您可以根椐您的實驗需要加入適量的無核酸酶的雙蒸水（PH>6.0）或TE緩沖液（PH 7.5-8.0），開啟瓶蓋溶解之前在3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘 的轉(zhuǎn)速下離心1分鐘，防止開蓋時引物散失。

3.合成的引物應(yīng)如何保存?
沒有溶解的引物非常穩(wěn)定，可以在-20℃下保存至少1年，溶解好的引物可以事先稀釋為100μmoL/L的儲存液，分裝數(shù)份保存于-20℃冰箱，可以保存至少半年以上（反復(fù)多次凍融會降低使用壽命）。使用前，將濃溶液稀釋成工作液（10 pmol/ml或20 pmol/ml）后進(jìn)行實驗。

4.如何檢測引物的純度？ 
實驗室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的一定濃度的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳,<12個堿基的引物用20%的膠，12-60個堿基的引物用16%的膠，>60個堿基的引物用12%的膠，取0.2OD左右的引物，用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和，上樣前加熱變性（95oC,2mins）。加入尿素的目的一是變性，二是增加樣品比重，容易加樣。600V電壓進(jìn)行電泳，一定時間后（約2-3小時），剝膠，用熒光TLC板在紫外燈下檢測帶型，在主帶之下沒有雜帶，說明純度是好的（有時由于變性不充分，主帶之上可能會有條帶，乃是引物二級結(jié)構(gòu)條帶）。

5.一般的合成的引物在5'和3'末端有磷酸基團(tuán)嗎?
沒有，5'和3'末端均為-OH基。如需要加磷酸基團(tuán)，訂貨時請?zhí)貏e注明，此時需收取磷酸化的費(fèi)用。

6.合成的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)時無目的帶，怎么辦?
PCR反應(yīng)失敗的原因很多，可以從以下幾個方面考慮。 
1） 引物和模板是否配對，同源性有多大?
2） 引物本身是否有立體結(jié)構(gòu).
3） PCR反應(yīng)用試劑是否能正常工作?
4） PCR儀是否工作正常?
5） PCR反應(yīng)條件是否合適?
如果一切正常，還無法解決問題時，我們可以免費(fèi)重新合成引物。

7.測定了引物的OD值后發(fā)現(xiàn)A260/A280<1.8，引物的純度合格嗎?
由于核酸在260nm附近有強(qiáng)吸收，而蛋白質(zhì)在280nm附近有強(qiáng)吸收，從生物體內(nèi)提取核酸時，常用A260/A280比值來評價核酸純度（比值在1.8～2.0之間），這一判斷是基于序列中A、G、C、T所占比例大致相同時的結(jié)果。而合成的DNA/RNA則不同，序列很短 （通常在20～30個堿基之間），其中A、G、C、T各種堿基所占比例很不相同，由于各種堿基的摩爾消光系數(shù)不同，因此不同堿基構(gòu)成的引物的A260/A280比值也不同， 例如當(dāng)序列中C、T堿基的含量高時，該比值會大大低于1.8。所以不能用A260/A280的比值來判斷引物的純度.

8.PCR產(chǎn)物經(jīng)過克隆以后測序發(fā)現(xiàn)引物區(qū)與合成序列不相符合，怎么辦？ 
我們認(rèn)為這多數(shù)是PCR過程和克隆過程中引入的錯誤。遇到這種情況，請您： 
1） 可以要求我們重新免費(fèi)合成引物。 
2） 重新挑取克隆測序，會有找到正確克隆的可能.

9.如何將兩條互補(bǔ)的單鏈退火形成雙鏈？ 
用退火緩沖液（10mM Tris, pH 7.5 - 8.0, 50mM NaCl, 1mM EDTA）溶解引物, 將要退火的引物等摩爾數(shù)混合，總體積不要超過500微升，加熱到95℃ 2mins，然后緩慢冷卻至室溫（低于30度）即可。退火的產(chǎn)物可以放在4度待用。

10.使用3%的Agarose凝膠電泳分析合成的引物，發(fā)現(xiàn)有很多條泳帶，為什么?
對引物進(jìn)行電泳一定要使用變性PAGE電泳。由于引物是單鏈DNA，容易形成復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)，因此進(jìn)行Agarose電泳時，容易出現(xiàn)多條泳帶，更無法用Agarose電泳進(jìn)行定量了。

11.能否根據(jù)引物電泳后EB染色后條帶的亮度對合成的引物進(jìn)行定量?
不能。因為EB是通過嵌入到核酸的雙螺旋間而使其著色的。合成的DNA分子為單鏈，只有通過自身回折形成局部發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)或鏈間形成部分雙螺旋結(jié)構(gòu)，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成雙螺旋的能力不同，因此染色能力不盡相同，也就不能根據(jù)EB染色帶的亮度來對合成的DNA進(jìn)行定量。

12.2OD的引物可以多少做次PCR反應(yīng)？ 
一般來講，20個堿基左右的2OD的引物zui少可以做400次PCR反應(yīng)。

13. DNA合成粗產(chǎn)物中含有什么雜質(zhì)？ 
DNA合成儀合成的粗產(chǎn)物，其中除了含有所需的目的DNA片段以外，還含有合成反應(yīng)過程中產(chǎn)生的目的片段短的失敗片段以及脫保護(hù)基團(tuán)產(chǎn)生的銨鹽，本公司提供的引物已全部通過純化去除短片段、通過脫鹽去除鹽分。

14.引物在常溫下運(yùn)輸，會降解嗎？ 
不會降解，干燥的引物在常溫至少可以穩(wěn)定存放二周以上。而一般的運(yùn)輸時間通常都在1-3天，所以您收到的引物不會降解。

15.為何長鏈引物的收費(fèi)要比短鏈引物要高？ 
通常在合成長鏈引物時，試劑的加入量要比短鏈引物要多很多，尤其是大于90bp的堿基以上的引物，由于成本的增加，從而導(dǎo)致價格也要高一些。