小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本要求: 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融;不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
產(chǎn)品名稱:小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA檢測(cè)試劑盒
英文名稱:mouse Catenin Beta 1 (CTNNb1) ELISA Kit
貨號(hào):ZK-M5253
規(guī)格: 96T/48T
品牌:子科生物ZIKER
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小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA檢測(cè)試劑盒在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問(wèn)題,子科生物技術(shù)部根據(jù)多年研發(fā)和臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下:
1、試劑盒特異性因素
1)固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板zui為常見(jiàn)。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時(shí)要對(duì)其使用的微孔板型號(hào)進(jìn)行認(rèn)證,評(píng)估。
2)包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測(cè)定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術(shù)條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達(dá)到100%,所以有些非特異性顯色不可避免,只能盡可能提高純度,提高特異性。目前使用的包被抗原一般為合成多肽抗原。
3)包被抗體的效價(jià)。具有高親和力和高特異性的包被抗體,是決定試劑特異性的重要方面。
4 )封閉。是ELISA中重要的一步,目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙[2],減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA檢測(cè)試劑盒操作過(guò)程中的問(wèn)題造成假陽(yáng)性
1)加樣
對(duì)于間接ELISA標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽(yáng)性)標(biāo)本呈陽(yáng)性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
2)洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3) 溫育
每種試劑都有其佳反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
4)酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同。
小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA檢測(cè)試劑盒1011S Cleaved Caspase-8 (Asp391) Blocking Peptide 100µg Apoptosis Blocking Peptide -20C
1013S Jak1 Blocking Peptide 100µg Jak/Stat Pathway Blocking Peptide -20C
1015S EGR1 Blocking Peptide 100µg Neuroscience Blocking Peptide -20C
1016S LEF1 Blocking Peptide 100µg Development Blocking Peptide -20C
1021S Phospho-NF-kappaB p105 (Ser933) Blocking Peptide 100µg NF-kB Signaling Blocking Peptide -20C
1023S Phospho-IKK-alpha/beta (Ser176/180) Blocking Peptide 100µg NF-kB Signaling Blocking Peptide -20C
1024S PKA (Thr197) Biotinylated Peptide 1.25ml Peptides Biotinylated Peptide -20C
1025S β-Actin Blocking Peptide 100µg Cytoskeletal Signaling Blocking Peptide -20C
1026S Phospho-Bad (Ser112) Blocking Peptide 100µg Apoptosis Blocking Peptide -20C
1027S Phospho-GSK-3α (Ser21) Blocking Peptide 100µg PI3K / Akt Signaling Blocking Peptide -20C
1032S β-Tubulin Blocking Peptide 100µg Cytoskeletal Signaling Blocking Peptide -20C
1033S Cytochrome c Blocking Peptide 100µg Apoptosis Blocking Peptide -20C
1034S COX IV Blocking Peptide 100µg Cytoskeletal Signaling Blocking Peptide -20C
1035S Mre11 Blocking Peptide 100µg Cell Cycle / Checkpoint Blocking Peptide -20C
1036S PU.1 Blocking Peptide 100µg Lymphocyte Signaling Blocking Peptide -20C
1037S Survivin Blocking Peptide 100µg Apoptosis Blocking Peptide -20C
1038S Phospho-Stat1 (Tyr701) Blocking Peptide 100µg Jak/Stat Pathway Blocking Peptide -20C
1039S Jak2 Blocking Peptide 100µg Jak/Stat Pathway Blocking Peptide -20C
1044S Cyclin D1 Blocking Peptide 100µg Cell Cycle / Checkpoint Blocking Peptide -20C