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人組織蛋白酶D（cath-D）ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的處理方法
可用作 ELISA 測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、 細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定，有些 則需經(jīng)預(yù)處理。 
● 血清： 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。收集上清。如 有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
● 血漿： 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右 （ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液： 
用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成， 應(yīng)再次離心。
●細(xì)胞培養(yǎng)上清：
 檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集 上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 
●細(xì)胞： 
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí)，對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10 秒后，細(xì)胞 就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用PBS、理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉 淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5 分鐘，取上 清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。 
●組織標(biāo)本： 
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

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